脐带间充质干细胞分离培养方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113621566A(43)申请公布日2021.11.09(21)申请号202110668076.1A61P29/00(2006.01)(22)申请日2021.06.16(71)申请人广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司地址510000广东省广州市国际生物岛螺旋四路一号生产区第五层502单元(72)发明人陈海佳王小燕马岩岩黄幸李学家(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅(51)Int.Cl.C12N5/0775(2010.01)A61K35/28(2015.01)A61P19/02(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称脐带间充质干细胞分离培养方法(57)摘要本发明公开了脐带间充质干细胞分离培养方法。本发明所要保护的一个技术方案是培养间充质干细胞的组合物。所述组合物由胎牛血清、表皮生长因子和DMEM/F12培养基组成。所述DMEM/F12培养基由L‑谷氨酰胺、MEMNEAA和DMEM/F12基础培养基组成。实验证明使用本发明培养间充质干细胞的组合物分离培养人脐带间充质干细胞并在500g离心力条件下离心收集得到的人脐带间充质干细胞的细胞活率和扩增倍数均增强，细胞回收率也显著提高，并具有较强的成骨成软骨分化的能力，可应用于制备开发治疗骨关节炎相关的药物。CN113621566ACN113621566A权利要求书1/1页1.培养间充质干细胞的组合物，所述组合物由胎牛血清、表皮生长因子和DMEM/F12培养基组成，所述DMEM/F12培养基由L‑谷氨酰胺、MEMNEAA和DMEM/F12基础培养基组成。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述胎牛血清、表皮生长因子和DMEM/F12培养基的配比为：胎牛血清100μL～200μL，表皮生长因子10ng～40ng，DMEM/F12培养基800μL～900μL；所述DMEM/F12培养基中，所述L‑谷氨酰胺、MEMNEAA和DMEM/F12基础培养基的含量为L‑谷氨酰胺1mM～5mM，MEMNEAA0.05mM～0.2mM，DMEM/F12基础培养基体积百分含量98％。3.培养间充质干细胞的组合物，其特征在于：所述组合物由溶质和溶剂组成，所述溶质为胎牛血清和表皮生长因子，所述溶剂为DMEM/F12培养基，所述组合物中胎牛血清的体积百分含量为10％～20％，表皮生长因子的含量为10ng/mL～40ng/mL。4.根据权利要求或3所述的组合物，其特征在于：所述组合物中胎牛血清的体积百分含量为10％，表皮生长因子的含量为10ng/mL。5.根据权利要求1或2或3或4所述的组合物，其特征在于：所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。6.分离培养间充质干细胞的方法，其特征在于：所述方法包括利用权利要求1‑5中任一组合物从离体的人脐带的华通氏胶中分离培养人脐带间充质干细胞，且在收集所述人脐带间充质干细胞时使用300～500g离心力离心5‑10min进行离心富集。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述从离体的人脐带的华通氏胶中分离培养人脐带间充质干细胞的方法为组织块贴壁培养法。8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：收集所述人脐带间充质干细胞时使用500g离心力离心5min进行离心富集。9.权利要求6‑8中任一权利要求所述的方法分离培养的人脐带间充质干细胞在制备治疗骨关节炎药物中的应用。10.权利要求1‑5中任一权利要求所述的组合物和/或权利要求6‑8中任一权利要求所述的方法的下述任一种应用：B1)权利要求1‑5中任一权利要求所述的组合物和/或权利要求6‑8中任一权利要求所述的方法在提高培养的间充质干细胞诱导分化能力中的应用；B2)权利要求1‑5中任一权利要求所述的组合物和/或权利要求6‑8中任一权利要求所述的方法在提高培养的间充质干细胞细胞活率和/或扩增倍数中的应用；B3)权利要求1‑5中任一权利要求所述的组合物和/或权利要求6‑8中任一权利要求所述的方法在提高培养的间充质干细胞细胞回收率中的应用；B4)权利要求1‑5中任一权利要求所述的组合物在制备间充质干细胞产品中的应用。2CN113621566A说明书1/6页脐带间充质干细胞分离培养方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体涉及脐带间充质干细胞分离培养方法。背景技术[0002]与骨髓/脂肪间充质干细胞相比，脐带间充质干细胞(UmbilicalCordMesenchymalStemCells，UC‑MSCs)因其来源丰富，采集方便，易于获得，扩增能力和分化能力强。人脐带间充质干细胞(HumanUmbilicalCordMesenchymalStemCells，hUC‑MSCs)是存在于新生儿脐带组织