一种水稻果皮颜色基因Pb的分子标记及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106011258A(43)申请公布日2016.10.12(21)申请号201610481722.2(22)申请日2016.06.22(71)申请人海南波莲水稻基因科技有限公司地址570125海南省海口市紫荆路2-1号紫荆信息公寓26A(72)发明人黄培劲龙湍唐杰李佳林吴永忠(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王文君(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表1页附图1页(54)发明名称一种水稻果皮颜色基因Pb的分子标记及其应用(57)摘要本发明提供了一种水稻果皮颜色基因Pb的分子标记和应用，属于植物生物技术领域。本发明的分子标记通过一条正向引物和两条反向引物PCR扩增得到，前述引物的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1-3所示。利用该水稻果皮颜色基因Pb的分子标记，只需通过简单的PCR即可完成对水稻果皮颜色基因Pb的基因分型，预测水稻果皮颜色。本发明具有操作简便、分型快速、费用低廉等优势，更适合在大规模分子标记辅助选择中运用。CN106011258ACN106011258A权利要求书1/1页1.一种水稻果皮颜色基因Pb的分子标记，其特征在于，通过核苷酸序列如SEQIDNO.1-3所示的引物扩增得到。2.权利要求1所述的分子标记在鉴定水稻果皮颜色基因Pb基因型中的应用。3.权利要求1所述的分子标记在水稻育种中的应用。4.用于检测水稻果皮颜色基因Pb的特异性引物组合，其特征在于，含有核苷酸序列如SEQIDNO.1-3所示的引物。5.权利要求4所述的特异性引物组合在鉴定水稻果皮颜色基因Pb基因型中的应用。6.权利要求4所述的特异性引物组合在水稻种质资源改良中的应用。7.检测水稻果皮颜色基因Pb基因型的方法，其特征在于，对待测样本提取基因组DNA后，利用SEQIDNO.1所示的正向引物、SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的反向引物进行PCR，对PCR扩增产物大小进行分析，根据PCR产物大小确定Pb的基因型。8.一种检测水稻果皮颜色的方法，其特征在于，对待测样本提取基因组DNA后，利用SEQIDNO.1所示的正向引物、SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的反向引物进行PCR，对PCR扩增产物大小进行分析，根据PCR产物大小推测水稻果皮颜色。9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于，PCR的反应体系为：2×Taqmastermix4μL，10μM的正向、两个反向引物各1.5μL，10％DMSO0.5μL，模板DNA50-100ng，补ddH2O至10μL；PCR反应条件为：94℃，4min；94℃，20s，65℃，20s，72℃，30s，共32个循环；72℃，5min，16℃，10min。10.含有权利要求4所述的特异性引物组合的试剂盒。2CN106011258A说明书1/5页一种水稻果皮颜色基因Pb的分子标记及其应用技术领域[0001]本发明属于植物生物技术领域，具体地说，涉及一种水稻果皮颜色基因Pb的分子标记及其应用。背景技术[0002]水稻是我国最重要的粮食作物之一，全国有超过一半的人口以稻米为主食。随着社会经济的发展，人们对膳食营养品质的要求逐渐提高，稻米营养品质也受到越来越多的重视。紫米是一种具有较高营养价值的有色稻米。相较于一般白米不含有花色素苷，紫米果皮内积累了包括矢车菊素-3-葡萄糖苷和芍药素-3-葡萄糖苷在内的大量花色素苷，使其糙米呈紫色或黑色。花色素苷属于类黄酮物质，具有较强的抗氧化作用，能够有效清除活性氧自由基、羟自由基和DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基。与白米相比，紫米还含有丰富的膳食成分，包括人体必需氨基酸、植物脂肪、纤维素和铁、钙、锌等矿物质，尤其含有一般稻米缺乏的维生素C和胡萝素等。研究表明紫米具有抗癌和抑制肿瘤活性，减轻糖尿病并发症，减轻支气管病和心血管病病症，改善缺铁性贫血，抗过敏，消炎等功效。[0003]紫米的果皮颜色性状是由Pb和Pp两个基因共同调控的。当同时带有Pb和Pp时，果皮为紫色；当带有Pb不带有Pp时，果皮为棕色；当不带有Pb时，不论Pp是否存在果皮均为白色(RahmanMM，LeeKE，LeeES，etal.ThegeneticconstitutionsofcomplementarygenesPpandPbdeterminethepurplecolorvariationinpericarpswithcysnidin-3-O-glucosidedepositionsinblackrice.JPlantBiol，2013，56(1)：24-31)。Pp定位于第1染色体(HuJ，An