一种提高百子莲胚性细胞继代效果的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109717080A(43)申请公布日2019.05.07(21)申请号201910204560.1(22)申请日2019.03.18(71)申请人信阳农林学院地址464000河南省信阳市羊山新区新24大街与北环路交叉口西北(72)发明人岳建华董艳王志勇夏维丽李素青刘文杰(74)专利代理机构上海段和段律师事务所31334代理人李佳俊郭国中(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图2页(54)发明名称一种提高百子莲胚性细胞继代效果的方法(57)摘要本发明提供了一种提高百子莲胚性细胞继代效果的方法，包括如下步骤：S1、外植体的取材：取百子莲未开裂的小花苞进行消毒处理，切取小花梗外植体，将小花梗外植体切成小段；S2、愈伤组织的诱导和继代培养：取小花梗外植体小段接种于愈伤组织诱导培养基中诱导培养后，取带有残留小花梗组织的愈伤组织放置于愈伤组织继代培养基中继代培养；S3、胚性愈伤组织的诱导：取经步骤S2培养后获得的不含残留小花梗组织的愈伤组织放置于胚性愈伤组织诱导培养基中诱导培养；S4、胚性细胞的继代保存：取经步骤S3培养后获得的胚性细胞放置在继代保存培养基中继代保存。本发明优化了百子莲体胚发生体系，得到数量更多，性状更一致的百子莲胚性细胞。CN109717080ACN109717080A权利要求书1/1页1.一种提高百子莲胚性细胞继代效果的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、外植体的取材：取百子莲未开裂的小花苞进行消毒处理，切取小花梗外植体，将所述小花梗外植体切成小段；S2、愈伤组织的诱导和继代培养：取小花梗外植体小段接种于愈伤组织诱导培养基中进行诱导培养，然后，取带有残留小花梗组织的愈伤组织放置于愈伤组织继代培养基中进行继代培养；S3、胚性愈伤组织的诱导：取经步骤S2培养后获得的不含残留小花梗组织的愈伤组织放置于胚性愈伤组织诱导培养基中进行诱导培养；S4、胚性细胞的继代保存：取经步骤S3培养后获得的胚性细胞放置在继代保存培养基中进行继代保存培养，所述继代保存培养基中含有麦芽糖和IAA。2.根据权利要求1所述的提高百子莲胚性细胞继代效果的方法，其特征在于，步骤S1中，所述百子莲为5～6月份花期、4～5年生的百子莲；所述小花梗外植体切成0.7～1.0cm的小段。3.根据权利要求1所述的提高百子莲胚性细胞继代效果的方法，其特征在于，步骤S1中，所述消毒处理的步骤为：先用75％(v/v)乙醇处理50～70s，用ddH2O冲洗3～5次，然后用5％次氯酸钠消毒处理5～7min，之后ddH2O冲洗3～5次，再用75％乙醇处理50～70s，用ddH2O冲洗3～5次。4.根据权利要求1所述的提高百子莲胚性细胞继代效果的方法，其特征在于，步骤S2中，所述愈伤组织诱导培养基的组分包括：4.43g·L-1MS、1.5～2.0mg·L-1PIC、2.5～3.5％蔗糖、0.6～1.0％琼脂；所述愈伤组织诱导培养基的pH为5.8。5.根据权利要求1所述的提高百子莲胚性细胞继代效果的方法，其特征在于，步骤S2中，所述愈伤组织继代培养基的组分包括：4.43g·L-1MS、1.0～1.5mg·L-1PIC、2.5～3.5％蔗糖、0.6～1.0％琼脂；所述愈伤组织继代培养基的pH为5.8。6.根据权利要求1所述的提高百子莲胚性细胞继代效果的方法，其特征在于，步骤S2中，所述诱导培养的条件为：22～28℃暗培养15d；所述继代培养的条件为：22～28℃暗培养，以50～70d为一个继代周期，继代培养2次。7.根据权利要求1所述的提高百子莲胚性细胞继代效果的方法，其特征在于，步骤S3中，所述胚性愈伤组织诱导培养基的组分包括：4.43g·L-1MS、1.0～1.5mg·L-1PIC、2.5～3.5％蔗糖、0.6～1.0％琼脂；所述胚性愈伤组织诱导培养基的pH为5.8。8.根据权利要求1所述的提高百子莲胚性细胞继代效果的方法，其特征在于，步骤S3中，所述诱导培养的条件为：22～28℃暗培养，50～70d。9.根据权利要求1所述的提高百子莲胚性细胞继代效果的方法，其特征在于，步骤S4中，所述继代保存培养基的组分包括：4.43g·L-1MS、1％蔗糖、1.8～2.2％麦芽糖、0.5mg·L-1PIC、0.8～1.2mg·L-1IAA、0.6～1.0％琼脂；所述继代保存培养基的pH为5.8。10.根据权利要求1所述的提高百子莲胚性细胞继代效果的方法，其特征在于，步骤S4中，所述继代保存的条件为：放入2～8℃2～4d后取出，22～28℃黑暗培养，30d为一个继代培养周期。2CN109717080A说明书1/8页一种提高百子莲胚性细胞继代效果的方法技术领域[0001]本