一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109479723A(43)申请公布日2019.03.19(21)申请号201910012535.3(22)申请日2019.01.07(71)申请人信阳农林学院地址464100河南省信阳市平桥区北环路1号(72)发明人岳建华董艳张琰李蒙夏维丽施芹川王苗(74)专利代理机构南京业腾知识产权代理事务所(特殊普通合伙)32321代理人郑婷(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法(57)摘要本发明涉及一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，包括外植体的取材、愈伤组织的诱导、愈伤组织的继代培养、胚性愈伤组织的诱导、胚性细胞的成熟胚诱导以及体胚苗的诱导等步骤。本发明根据百子莲胚性启动与维持的激素合成代谢、信号转导特点，利用小花梗作为外植体诱导愈伤组织，通过愈伤组织继代和诱导，获得胚性愈伤组织，在体胚诱导期改变糖和激素配比，调控细胞极性，以诱导数量较多、发育同步的体细胞胚胎，并在已诱导的体细胞胚胎发育过程中，通过优化诱导培养基方案，调节激素的合成与信号，以获得形态完整，长势良好，数量较多的体胚苗。解决了百子莲胚性细胞在频繁继代过程中产生的成熟胚诱导数量少、胚胎败育、体胚苗数量低的问题。CN109479723ACN109479723A权利要求书1/1页1.一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)外植体的取材：5～6月份，取4～5年生百子莲未开裂的小花苞，在无菌操作台上进行消毒处理，然后用ddH2O冲洗3～5次，用无菌滤纸吸干小花苞表面的水分，然后切取小花梗外植体，将小花梗外植体切成0.7～1.0cm的小段；(2)愈伤组织的诱导：取0.7～1.0cm的小花梗外植体小段，平放状态接种于愈伤组织诱导培养基中，22～28℃暗培养12～18d，可见白色半透明的愈伤组织生成，30d天后进行愈伤组织的继代培养；(3)愈伤组织的继代培养：取带有残留小花梗组织的愈伤组织细胞团，放置在愈伤组织继代培养基上，22～28℃暗培养，以60d为一个继代周期，继代培养2次，愈伤组织逐渐转变为微黄色；(4)胚性愈伤组织的诱导：取不含残留小花梗组织的愈伤组织，放置在胚性愈伤组织诱导培养基上，22～28℃暗培养，60d后，微黄色愈伤组织表面出现单细胞起源的胚性愈伤组织；(5)胚性细胞的成熟胚诱导：取0.5g胚性愈伤组织，放置在成熟胚诱导培养基上，22～28℃光照培养，得到成熟胚；(6)体胚苗的诱导：取0.25g成熟胚组织，放置在体胚苗诱导培养基上，22～28℃光照培养，30d后得到带有根系的体胚苗。2.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述消毒处理的方法是：先在75％的乙醇溶液里浸渍1min，接着用ddH2O冲洗3～5次，然后在2％的次氯酸钠溶液里浸渍5min。3.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述愈伤组织诱导培养基组分为：MS+2.0mg·L-1PIC+3％蔗糖+1％琼脂，pH5.8。4.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述愈伤组织继代培养基组分为：MS+1.5mg·L-1PIC+3％蔗糖+1％琼脂，pH5.8。5.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述胚性愈伤组织诱导培养基组分为：MS+1.5mg·L-1PIC+3％蔗糖+1％琼脂，pH5.8。6.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，步骤(5)中，所述成熟胚诱导培养基的组分为：MS+2％蔗糖+1％麦芽糖+1％琼脂，pH5.8。7.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，步骤(5)中，所述光照培养的光照强度为2500lx。8.如权利要求1所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，步骤(6)中，所述体胚苗诱导培养基的组成为：MS+2％蔗糖+多效唑0.5mg·L-1+0.6％琼脂，pH5.8。9.如权利要求1至8任一项所述提高百子莲体胚苗诱导效果的方法，其特征在于，步骤(6)中，所述光照培养的光照强度为3500lx。2CN109479723A说明书1/4页一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法技术领域[0001]本发明属于植物良种快繁技术领域，具体涉及一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法。背景技术[0002]百子莲(Agapanthuspraecoxssp.orientalis)又名“蓝百合”、“非洲百合”，原产非洲南部的南非地区及莱索托王国，为单子叶多年生草本花卉，具有较强的观赏性。近半个世纪以来，百子莲在国际花卉业发展中脱颖