木藜芦毒素III半抗原、人工抗原及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111646898A(43)申请公布日2020.09.11(21)申请号202010780671.XC07K14/795(2006.01)(22)申请日2020.08.06C07K16/44(2006.01)G01N33/558(2006.01)(71)申请人中国农业科学院蜜蜂研究所地址100093北京市海淀区香山北沟1号(72)发明人杨术鹏李熠傅怡张金震周金慧杨宇晖(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人张璐(51)Int.Cl.C07C67/08(2006.01)C07C69/67(2006.01)C07K14/47(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/77(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图2页(54)发明名称段，同时为“madhoney”及食物中毒的快速检测木藜芦毒素III半抗原、人工抗原及其制备提供有力手段。方法与应用(57)摘要本发明属于生物化工技术领域，具体地说，涉及木藜芦毒素III半抗原、人工抗原及其制备方法与应用。所述木藜芦毒素III半抗原，结构如下所示：；木藜芦毒素Ⅲ人工抗原是由所述木藜芦毒素III半抗原与载体蛋白偶联得到。利用所述木藜芦毒素Ⅲ人工抗原免疫动物，可得到效价高，灵敏度高的特异性抗体。本发明提供的木藜芦毒素Ⅲ半抗原及其制备的抗体为建立快速、简便、价廉、灵CN111646898A敏、特异的木藜芦毒素Ⅲ检测方法提供了新手CN111646898A权利要求书1/1页1.木藜芦毒素III半抗原，其特征在于，结构如下所示：。2.权利要求1所述木藜芦毒素III半抗原的制备方法，其特征在于，包括：将木藜芦毒素Ⅲ与琥珀酸酐在室温下避光反应，即得。3.木藜芦毒素Ⅲ人工抗原，其特征在于，由权利要求1所述木藜芦毒素Ⅲ半抗原与载体蛋白偶联后得到；其中，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。4.根据权利要求3所述的木藜芦毒素Ⅲ人工抗原，其特征在于，所述木藜芦毒素Ⅲ半抗原与载体蛋白的摩尔比为23~25:1。5.权利要求3所述的木藜芦毒素Ⅲ人工抗原的制备方法，其特征在于，采用活化酯法将载体蛋白偶联于所述木藜芦毒素Ⅲ半抗原的羧基碳上。6.权利要求1所述的木藜芦毒素Ⅲ半抗原或权利要求3或4所述的木藜芦毒素Ⅲ人工抗原在以下任一方面的应用：①在制备木藜芦毒素Ⅲ特异性抗体中的应用；②在检测木藜芦毒素Ⅲ特异性抗体中的应用。7.木藜芦毒素Ⅲ特异性抗体，其特征在于，以权利要求3或4所述的木藜芦毒素Ⅲ人工抗原为免疫原，免疫动物制备得到。8.权利要求7所述的木藜芦毒素Ⅲ特异性抗体在以下任一方面的应用：（1）在检测木藜芦毒素Ⅲ中的应用；（2）在制备木藜芦毒素Ⅲ的免疫层析试纸条中的应用；（3）在制备木藜芦毒素Ⅲ的酶联免疫分析检测试剂盒中的应用。9.一种检测试剂或检测试纸，其特征在于，含有权利要求7所述的抗体。10.一种试剂盒，其特征在于，含有权利要求7所述的抗体。2CN111646898A说明书1/8页木藜芦毒素III半抗原、人工抗原及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明属于生物化工技术领域，具体地说，涉及木藜芦毒素III半抗原、人工抗原及其制备方法与应用。背景技术[0002]杜鹃花科植物广泛分布于南北半球的温带和北半球的亚寒带地区，包含50余属，1700多种。我国杜鹃花科分布较多，其特点是以西南山区为中心，遍布全国。杜鹃花科中有毒植物甚多，高达百余种，尤其是集中在马醉木属、木黎芦属、南烛属、杜鹃花和山月桂属。人畜一旦误食有毒杜鹃，往往出现中毒症状，如呕吐、腹痛、头晕、呼吸困难，严重者还出现昏睡、角弓反涨、呼吸麻痹和惊厥等症状。现代科学研究表明：有毒杜鹃中通常含有一类结构独特的木黎芦烷类毒素，其中以木黎芦毒素III为代表性物质。虽然杜鹃花科植物的毒性很大，但由于它们多为灌木，大多生长在山地林中，因此能够直接构成危害人畜的种类并不是太多。人的中毒往往是发生在部分可供药用或者食用的杜鹃，如大白花杜鹃和金叶子。此外，由于部分有毒杜鹃属于蜜源植物，盛花时节，能够分泌大量的花蜜，由于其花蜜中含有木黎芦毒素III等毒素，它们通过蜜蜂采集行为，迁移并富集在蜂蜜中，形成有毒蜂蜜，即“MadHoney”。土耳其环黑海地区和尼泊尔地区常年发生蜂蜜中毒事件，皆是由食用“MadHoney”引起。如何有效地检测蜂蜜和食用杜鹃花中木黎芦毒素的含量，保障人的生命健康，已经成为食品安全领域亟需解决的难题之一。[0003]当前，木黎芦毒素III的检测方法主要是基于高效液相色谱或者液相串联质谱法等仪器分析方法进行检测。仪器分析具有准确度高、灵敏度佳等优点，但是通常需要繁琐的样本前处理过程，而且需要