一种虾夷扇贝毒素半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115746015A(43)申请公布日2023.03.07(21)申请号202211300672.5G01N33/577(2006.01)(22)申请日2022.10.21G01N33/58(2006.01)(71)申请人舟山市疾病预防控制中心地址316021浙江省舟山市定海区千岛街道翁山路268号(72)发明人王恒严剑波王玉超(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102专利代理师赵崇杨(51)Int.Cl.C07D493/22(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K16/44(2006.01)G01N33/53(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图2页(54)发明名称一种虾夷扇贝毒素半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种虾夷扇贝毒素半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。所述虾夷扇贝毒素半抗原的结构式如式(I)所示，应用该半抗原制备得到用于检测虾夷扇贝毒素的人工抗原和抗体。采用本发明提供的虾夷扇贝人工抗原、抗体制备的酶联免疫试剂盒对虾夷扇贝毒素的检测灵敏度为0.001ng/mL，IC50为0.11ng/mL，线性范围为0.001～0.75ng/mL。该酶联免疫试剂盒，使用方便、检测成本低，检测方法快速、高效、准确，适合海洋藻类、贝类组织中虾夷扇贝毒素残留的现场控制和大量样本的筛查，具有良好的应用前景。CN115746015ACN115746015A权利要求书1/2页1.一种虾夷扇贝毒素半抗原，其特征在于，所述半抗原的结构式如式(I)所示：2.权利要求1所述虾夷扇贝毒素半抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.将虾夷扇贝毒素溶于溶剂中，加入缓冲液，再加入1,2‑乙二硫醇反应，反应完毕后萃取并合并有机相，洗涤、干燥、过滤，除溶剂，干燥得黄色固体；S2.将步骤S1所得黄色固体溶于溶剂中，加入环氧溴丙烷反应，反应完毕后去除溶剂及过量的环氧溴丙烷，得黄色膏体，再多次重结晶，干燥得黄色固体，即为式(I)所示虾夷扇贝毒素半抗原。3.权利要求1所述虾夷扇贝毒素半抗原在制备虾夷扇贝毒素人工抗原中的应用。4.一种虾夷扇贝毒素人工抗原，其特征在于，所述虾夷扇贝毒素人工抗原的结构式如式(II)所示：5.根据权利要求4所述虾夷扇贝毒素人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白或鸡卵白蛋白。6.权利要求4或5所述虾夷扇贝毒素人工抗原的制备方法，其特征在于，将权利要求1所述虾夷扇贝毒素半抗原溶于溶剂后，滴加到含有载体蛋白的缓冲液中反应，再加入乙醇胺封闭，调节pH至7.2～7.5，4～6℃反应，透析纯化，即得式(II)所示虾夷扇贝毒素人工抗原。7.权利要求4或5所述虾夷扇贝毒素人工抗原在制备虾夷扇贝毒素抗体中的应用。2CN115746015A权利要求书2/2页8.一种虾夷扇贝毒素抗体，其特征在于，是以权利要求4或5所述虾夷扇贝毒素人工抗原为免疫原免疫动物制备得到。9.一种检测虾夷扇贝毒素的试剂盒，其特征在于，包含权利要求4或5所述虾夷扇贝毒素人工抗原和权利要求8所述虾夷扇贝毒素抗体。10.一种检测虾夷扇贝毒素的免疫分析方法，其特征在于，以权利要求4或5所述虾夷扇贝毒素人工抗原为包被原，以权利要求8所述虾夷扇贝毒素抗体为检测抗体进行检测。3CN115746015A说明书1/9页一种虾夷扇贝毒素半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及食品检测技术领域，更具体地，涉及一种虾夷扇贝毒素半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。背景技术[0002]虾夷扇贝毒素(Yessotoxin，YTX)及其衍生物是一类含有2个磺酰基的脂溶性多环聚醚类化合物，它们的化学结构极为相近，其中有些是由海洋甲藻产生的，部分为滤食性贝类体内代谢转化而来。目前已检出的体内含有YTXs的贝类等海洋生物分布于中国、日本、新西兰、挪威、意大利、加拿大和美国等国家附近海域。生物毒理学研究显示YTX是一种毒性较强的细胞毒素，急性致死率很高，小鼠致死剂量在100μg/kg左右，半致死剂量(LC50)则随着生物的不同而各有差异，数值在80‑750000μg/kg之间。欧盟制定了相关的法律法规，将YTX的食用安全浓度规定为1mg/kg贝肉，2013年将安全限量调整为3.75mg/kg贝肉。YTX能降低细胞内cAMP浓度，诱导激活人的成神经细胞癌细胞系、肝细胞、肝癌细胞、Hela细胞及鼠成肌细胞系凋亡相关的Capase家族蛋白，因而被认为是一种肿瘤促进剂。[0003]目前，虾夷扇贝毒素测定方法的文献报道不多，包括小鼠生物法、薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)以及色谱‑质谱联用