蜂蜜中雷公藤甲素的测定方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114544829A(43)申请公布日2022.05.27(21)申请号202210041421.3G01N30/86(2006.01)(22)申请日2022.01.14(71)申请人四平市食品药品检验所地址136000吉林省四平市铁西区南湖大路357号(72)发明人王丹彧马彧刘丽李正刚温铁岩韩凤(74)专利代理机构吉林省中玖专利代理有限公司22219专利代理师李泉宏(51)Int.Cl.G01N30/06(2006.01)G01N30/12(2006.01)G01N30/14(2006.01)G01N30/72(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图1页(54)发明名称蜂蜜中雷公藤甲素的测定方法(57)摘要本发明提供了一种蜂蜜中雷公藤甲素的测定方法，属于食品安全检测技术领域。本发明针对目前采用高效液相法基质干扰大，灵敏度低，检出限高等问题，无法满足蜂蜜这类基质复杂样品对该类化合物检测的要求。本发明中采用乙酸乙酯提取蜂蜜中雷公藤甲素，经N‑丙基乙二胺固相萃取柱净化，用液相色谱‑串联质谱测定，外标法定量。本发明方法具有专属性强，分辨率高的特点，可以进行蜂蜜中雷公藤甲素的定性、定量检测。CN114544829ACN114544829A权利要求书1/2页1.一种蜂蜜中雷公藤甲素的测定方法，其特征在于，该方法的步骤如下：1)试样的制备与保存：对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀；对有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，将样品瓶置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，在融化时必须注意防止水分挥发；装入洁净容器，密封，标明标记；2)试样的提取：称取蜂蜜试样2.000g置于50mL离心管中，加入4mL水与蜂蜜充分混匀，加入乙酸乙酯15mL，经涡旋震荡和超声处理后，离心分离取上清液，沉淀再加入乙酸乙酯15mL，重复提取1次，合并上清液，旋转蒸发至干；3)试样的净化：残渣用2mL乙酸乙酯溶解，过N‑丙基乙二胺固相萃取柱，用乙酸乙酯5ml洗脱，收集洗脱液，氮气吹干；准确量取甲醇溶液1mL溶解残余物，经0.22μm微孔滤膜过滤，供液相色谱‑串联质谱测定；5)系列基质标准工作溶液的制备：准确量取雷公藤甲素标准中间液，用空白样品提取液溶解稀释，配制成雷公藤甲素的系列基质标准工作溶液；所述的雷公藤甲素标准中间液为1μg/mL的雷公藤甲素甲醇溶液；所述的空白样品提取液，不加试样重复步骤2)和步骤3)获得；6)液相色谱‑串联质谱测定A、液相色谱条件：色谱柱：C18柱，柱长75mm以上，粒径2.7μm；流动相：A为0.1wt％的甲酸溶液，B为甲醇；梯度洗脱程序如下：0～4min90％A和10％B，4～6min5％A和95％B，6～7min3％A和97％B，7～10min90％A和10％B；流速：300μL/min；柱温：室温；进样量：5μL；B、质谱参考条件：离子源：电喷雾离子源；检测方式：多反应模式；扫描方式：正离子模式扫描；电喷雾电压：5500V；气帘气：20L/min；雾化气压力：55L/min；辅助气压力：40L/min；离子源温度：500℃；定性离子对为361.1/141.2或361.1/104.9、定量离子对为361.1/128.0、去簇电压100V、碰撞能量定量测定为80eV、定性测定为80或60eV、碰撞室入口电压10V、碰撞室出口电压13V；C、定性测定通过试样色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、色谱峰的特征离子与相应浓度标准色谱峰的特征离子相对照定性；雷公藤甲素的参考保留时间为4.81min，试样与其保留时间的相对偏差不大于2.5％；试样特征离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，允许的偏差如下：相对离子丰度>50时，允许的相对偏差为±20；相对离子丰度20～50时，允许的相对偏差±25；相对离子丰度10～20时，允许的相对偏差±30；相对离子丰度≤10时，允许的相对偏差±50；D、定量测定按上述条件设定仪器条件，以基质标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制基质标准工作曲线，按外标法计算试样中雷公藤甲素的含量；样品中雷公藤甲素质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内，超出标准工作曲线质量浓度上限的样品应稀释后进样；E、空白试验用空白样品提取液进样，均按试样同法操作；2CN114544829A权利要求书2/2页7)结果计算结果按式(1)计算：式(1)中：X—试样中各待测组分的含量，μg/kg；C—从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，ng/mL；V—试样溶液最终定容体积，mL；f—试样制备过程中的稀释倍数；m—试样质量，g；计算结果需扣除空白值，测定结果用2次平行测定结果的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。2.根据权利要求1