雷公藤甲素作为特征识别物在鉴别蜂蜜中是否含有雷公藤蜂蜜中的应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105758948A(43)申请公布日2016.07.13(21)申请号201610105513.8(22)申请日2016.02.25(71)申请人中国农业科学院蜜蜂研究所地址100093北京市海淀区香山北沟1号(72)发明人薛晓锋吴黎明曹葳蕤杜冰张中印赵柳微王妙韩丽妲(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人郝瑞刚(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图5页(54)发明名称雷公藤甲素作为特征识别物在鉴别蜂蜜中是否含有雷公藤蜂蜜中的应用(57)摘要本发明涉及蜂蜜鉴别技术领域，尤其涉及鉴别蜂蜜中是否含有毒雷公藤蜂蜜的方法，具体地，本申请发现雷公藤甲素可以作为特征识别物用于雷公藤蜂蜜的鉴别，在此基础之上，提出了采用LC-Q-TOF或LC/MS/MS鉴别蜂蜜的方法，并对其具体检测条件进行了优化。本发明首先建立起了识别雷公藤蜂蜜的方法，对于蜂蜜的消费安全有着重要意义。CN105758948ACN105758948A权利要求书1/2页1.雷公藤甲素作为特征识别物在鉴别蜂蜜中是否含有雷公藤蜂蜜中的应用。2.以雷公藤甲素作为特征识别物，采用LC-Q-TOF或LC/MS/MS检测蜂蜜中是否含有雷公藤蜂蜜的方法。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述LC-Q-TOF的飞行时间质谱图中至少含有361.1646±5ppm质量数(M+H)准分子离子峰；优选地，所述飞行时间质谱图中还含有如下质量数(M+H)准分子离子峰中的一个或多个：359.1624±5ppm，307.1820±5ppm，385.1718±5ppm，327.1720±5ppm，355.2032±5ppm，371.1893±5ppm，339.2081±5ppm；更优选地，所述飞行时间质谱图中同时含有上述7个准分子离子峰。4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，检测前，采用如下方法对所述蜂蜜样品进行预处理：取蜂蜜样品，每1g蜂蜜中加入0.8-1.2mL水溶解，向溶解液中加入0％-0.3％的甲酸乙腈溶液或甲酸甲醇溶液斡旋提取1-8min，加入无水硫酸镁和氯化钠后离心，取有机相并用氮气吹干，然后加入40％-60％的乙腈水溶液或甲醇水溶液复溶，过滤即得。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：取蜂蜜样品，每1g蜂蜜中加入1mL水溶解，向溶解液中加入0％-0.2％的甲酸乙腈溶液或甲酸甲醇溶液斡旋提取5min，加入无水硫酸镁和氯化钠后离心，取有机相并用氮气吹干，然后加入50％的乙腈水溶液或甲醇水溶液复溶，过滤即得。6.根据权利要求2或3或5所述的方法，其特征在于，所述LC-Q-TOF中的LC包括如下检测条件：色谱柱：C18柱或C8柱或苯基柱，优选为C18柱，进一步优选为EclipsePlusC18，2.1x100mm，1.8μm；流动相：A乙腈或甲醇，B0％-0.2％的甲酸水溶液，梯度洗脱：0-2min5％B，2-20min90％B，20-21min5％B，21-35min5％B；所述Q-TOF包括如下检测条件：目标离子：361.1646；碰撞能量30eV。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述LC还包括如下检测条件：流速：0.15-0.6mL/min，柱温：25-35℃，进样量：1-30μL；优选为：流速：0.2mL/min，柱温：30℃，进样量：2μL；和/或：所述Q-TOF还包括如下检测条件：ESI正离子，干燥气氮气流速：5-7mL/min，温度280-320℃，气帘气流速：9-11L/min，温度330-370℃，电力电压3800-4200V；MSscan全扫描，质量数范围100-2000，参比实时校正；优选为：ESI正离子，干燥气氮气流速：6mL/min，温度300℃，气帘气流速：10L/min，温度350℃，电离电压4000V；MSscan全扫描，质量数范围100-2000，参比实时校正。8.根据权利要求2或3或5所述的方法，其特征在于，所述LC/MS/MS中的LC包括如下条件：色谱柱：C18柱或C8柱或苯基柱，优选为C18柱，进一步优选为agilentSBC18，2CN105758948A权利要求书2/2页2.1x50mm，1.8μm；流动相：A乙腈或甲醇，B0％-0.2％的甲酸水溶液，梯度洗脱，0-1min5％B，1-4min20％B，4-6min90％B，6-8min5％B；MS/MS包括如下条件：扫描方式：MRM，雷公藤甲素361>143，361>197；倍增电压：0-400。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述LC还包括：流速：0.15-0.6mL/min，柱温：2