鸭圆环病毒和鸭肝炎病毒二重PCR检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102605104A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102605104A(43)申请公布日2012.07.25(21)申请号201210071889.3(22)申请日2012.03.16(71)申请人广西壮族自治区兽医研究所地址530001广西壮族自治区南宁市友爱北路51号(72)发明人谢芝勋赵光远谢丽基谢志勤刘加波庞耀珊邓显文范晴(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书55页页序列表序列表22页页附图附图22页页(54)发明名称鸭圆环病毒和鸭肝炎病毒二重PCR检测试剂盒(57)摘要本发明公开了一种鸭圆环病毒和鸭肝炎病毒二重PCR检测试剂盒。本发明提供了一种检测鸭圆环病毒与鸭肝炎病毒的引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。本发明的实验证明，本发明建立一次PCR反应就能同时检测和鉴别DuCV、DHV两种病原体的二重PCR技术，具有良好特异性，而且本试验在引物设计上利用扩增片段长度的不同直接判定扩增结果，使得该方法在结果判定时更简便、直观和实用。CN102654ACN102605104A权利要求书1/1页1.检测鸭圆环病毒与鸭肝炎病毒的引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比为2∶2∶(1.5-2)∶(1.5-2)；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比具体为2∶2∶1.8∶1.8。3.检测鸭圆环病毒与鸭肝炎病毒的PCR试剂，由权利要求1或2所述的引物组、PCR缓冲液和水组成；所述引物组中的引物1在所述PCR试剂中的终浓度具体为2μmol/L；所述引物组中的引物2在所述PCR试剂中的终浓度具体为2μmol/L；所述引物组中的引物3在所述PCR试剂中的终浓度具体为1.5-2μmol/L；所述引物组中的引物4在所述PCR试剂中的终浓度具体为1.5-2μmol/L；所述引物组中的引物3在所述PCR试剂中的终浓度进一步具体为1.8μmol/L；所述引物组中的引物4在所述PCR试剂中的终浓度进一步具体为1.8μmol/L。4.检测鸭圆环病毒与鸭肝炎病毒的PCR试剂盒，包括权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂。5.权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂或权利要求4所述试剂盒在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有鸭圆环病毒与鸭肝炎病毒产品中的应用。6.根据权利要求5所述应用，其特征在于：所述检测和/或辅助检测待测样品中是否含有鸭圆环病毒与鸭肝炎病毒为用权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂或权利要求4所述试剂盒对所述待测样品进行二重PCR扩增。7.根据权利要求5或6所述应用，其特征在于：所述二重PCR扩增的退火温度为50℃-55℃，所述二重PCR扩增的退火温度具体为55℃。8.一种检测鸭圆环病毒的引物对A，由权利要求1或2所述的引物组中的所述引物1和所述引物2组成；或一种检测鸭肝炎病毒的引物对B，由权利要求1或2所述的引物组中的所述引物3和所述引物4组成。9.权利要求8所述的引物对A在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有鸭圆环病毒产品中的应用；或权利要求8所述的引物对B在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有鸭肝炎病毒产品中的应用。2CN102605104A说明书1/5页鸭圆环病毒和鸭肝炎病毒二重PCR检测试剂盒技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种鸭圆环病毒和鸭肝炎病毒二重PCR检测试剂盒。背景技术[0002]鸭圆环病毒(DuckCircovirus，DuCV)和鸭肝炎病毒(DHV)均常见于鸭，鸭圆环病毒(DuCV)可造成鸭生长迟缓、羽毛凌乱、体重减轻等症状，可感染禽类的免疫系统，引起免疫抑制。鸭肝炎病毒(DHV)引起的鸭病毒性肝炎是一种可使病鸭高度致死的迅速传播的病毒性疾病，病程短且死亡快，死亡率可高达100％。这两种疾病流行广泛，传播迅速，发病率和死亡率高，易混合感染，目前对世界范围水禽危害较为严重，给养鸭业带来巨大的经济损失。鸭圆环病毒破坏病鸭的免疫系统，造成免疫抑制，鸭肝炎病毒流行广泛且高度致死，病鸭极易同时感染这两种病毒，一旦同时发生感染则会造成极大的损失。目前对DuCV和DH