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(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102719564A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102719564A(43)申请公布日2012.10.10(21)申请号201210212875.9C12R1/93(2006.01)(22)申请日2012.06.25(71)申请人广西壮族自治区兽医研究所地址530001广西壮族自治区南宁市友爱北路51号(72)发明人谢芝勋谢丽基邓显文谢志勤庞耀珊范晴刘加波(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅任凤华(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书66页页序列表序列表33页页附图附图11页页(54)发明名称鸭I型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的三重PCR试剂盒及其应用(57)摘要本发明公开了一种鉴定或辅助鉴定鸭相关病毒的引物对组、试剂盒及其应用。本发明所提供的引物对组由如下三个引物对组成:序列1和序列2、序列3和序列4,以及序列5和序列6分别所示的两条单链DNA组成的三个引物对;所述鸭相关病毒为番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鸭I型肝炎病毒中的至少一种。本发明建立一次PCR反应就能同时检测和鉴别番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鸭I型肝炎病毒三种病原体的三重PCR技术,具有特异性强、灵敏度高(最低检测线1pg)、低成本、高效率等优点,而且在引物设计上利用扩增片段长度的不同直接判定扩增结果,使得该方法在结果判定时更简便、直观和实用。CN10279564ACN102719564A权利要求书1/1页1.鉴定或辅助鉴定鸭相关病毒的引物对组,所述鸭相关病毒为番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鸭I型肝炎病毒中的至少一种,其特征在于:所述引物对组由三个引物对组成,第一个引物对是由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定所述番鸭细小病毒的引物对1,第二个引物对是由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定所述鸭圆环病毒的引物对2,第三个引物对是由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定所述鸭I型肝炎病毒的引物对3。2.鉴定或辅助鉴定鸭相关病毒的引物对组,由两个引物对组成,其中一个引物对是由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定所述番鸭细小病毒的引物对1,另一个引物对是下述两个引物对中的任一个:由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定所述鸭圆环病毒的引物对2,和由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定所述鸭I型肝炎病毒的引物对3;所述鸭相关病毒为番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鸭I型肝炎病毒中的至少一种。3.根据权利要求1或2所述的引物对组,其特征在于:所述引物对组中的所述引物对1、所述引物对2和所述引物对3在PCR反应体系中的摩尔比为5:5:3;所述引物对1、所述引物对2和所述引物对3中各引物对的两条引物均等摩尔。4.鉴定或辅助鉴定番鸭细小病毒的引物对,由两条单链DNA组成,所述两条DNA单链分别为序列表中序列1所示的单链DNA,和序列表中序列2所示的单链DNA。5.鉴定或辅助鉴定鸭相关病毒的试剂盒,包含权利要求1-3中任一所述的引物对组或权利要求4所述的引物对;所述鸭相关病毒为番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鸭I型肝炎病毒中的至少一种。6.权利要求1-3中任一所述的引物对组或权利要求4所述的引物对的制备方法,其特征在于:所述制备方法包括将权利要求1-3中任一所述的引物对组或权利要求4所述的引物对中各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。7.权利要求5所述PCR试剂盒的制备方法,包括如下步骤:将权利要求1-3中任一所述的引物对组或权利要求4所述的引物对中各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装后,与下述物质中的至少一种包装在同一试剂盒内:PCR反应缓冲液、DNA聚合酶和4种dNTP。8.权利要求1-3中任一所述的引物对组,或权利要求4所述的引物对,或权利要求5所述的试剂盒的在制备鉴定或辅助鉴定待测样品中是否含有鸭相关病毒产品中的应用;所述鸭相关病毒为番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鸭I型肝炎病毒中的至少一种。9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于:所述鉴定或辅助鉴定待测样品中是否含有鸭相关病毒为利用权利要求1-3中任一所述的引物对组,或权利要求4所述的引物对,或权利要求5所述的试剂盒对所述待测样品进行PCR扩增;所述PCR扩增的退火温度为50-60℃。10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于:所述PCR扩增的退火温度为55℃。2CN102719564A说明书1/6页鸭I型肝炎病毒、鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的三重PCR试剂盒及其应用技