鸭新城疫病毒和鸭圆环病毒二重PCR检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102618668A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102618668A(43)申请公布日2012.08.01(21)申请号201210084010.9(22)申请日2012.03.27(71)申请人广西壮族自治区兽医研究所地址530001广西壮族自治区南宁市友爱北路51号(72)发明人谢芝勋许宗丽谢丽基庞耀珊谢志勤刘加波邓显文范晴(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书66页页序列表序列表22页页附图附图55页页(54)发明名称鸭新城疫病毒和鸭圆环病毒二重PCR检测试剂盒(57)摘要本发明公开了一种鸭新城疫病毒和鸭圆环病毒二重PCR检测试剂盒。本发明提供了一种检测新城疫病毒和鸭圆环病毒的引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。本发明的实验证明，本研究设计了2对引物，建立了新城疫病毒和鸭圆环病毒的二重PCR的检测方法，可以同时检测和鉴别新城疫病毒和鸭圆环病毒两种病原体的二重PCR技术，具有操作简便、敏感性高、特异性强和重复性好等优点。CN10268ACN102618668A权利要求书1/1页1.检测新城疫病毒和鸭圆环病毒的引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比为0.1-0.5∶0.1-0.5∶1∶1；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比具体为0.2∶0.2∶1∶1。3.检测新城疫病毒和鸭圆环病毒的PCR试剂，由权利要求1或2所述的引物组、PCR缓冲液和水组成；所述引物组中的引物1和引物2在所述PCR试剂中的终浓度均具体为0.1μmol/mL-0.5μmol/mL；所述引物1和所述引物2在所述PCR试剂中的终浓度均进一步具体为0.2μmol/mL；所述引物组中的引物3和引物4在所述PCR试剂中的终浓度均具体为0.8μmol/mL-1.2μmol/mL；所述引物3和所述引物4在所述PCR试剂中的终浓度均进一步具体为1μmol/mL。4.检测新城疫病毒和鸭圆环病毒的PCR试剂盒，包括权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂。5.权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂或权利要求4所述试剂盒在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有新城疫病毒和鸭圆环病毒产品中的应用。6.根据权利要求5所述应用，其特征在于：所述检测和/或辅助检测待测样品中是否含有新城疫病毒和鸭圆环病毒为用权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂或权利要求4所述试剂盒对所述待测样品进行二重PCR扩增。7.根据权利要求5或6所述应用，其特征在于：所述二重PCR扩增的退火温度为50℃-65℃，所述二重PCR扩增的退火温度具体为55℃。8.一种检测新城疫病毒的引物对A，由权利要求1或2所述的引物组中的所述引物1和所述引物2组成；或一种检测鸭圆环病毒的引物对B，由权利要求1或2所述的引物组中的所述引物3和所述引物4组成。9.权利要求8所述的引物对A在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有新城疫病毒产品中的应用；或权利要求8所述的引物对B在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有鸭圆环病毒产品中的应用。2CN102618668A说明书1/6页鸭新城疫病毒和鸭圆环病毒二重PCR检测试剂盒技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种鸭新城疫病毒和鸭圆环病毒二重PCR检测试剂盒。背景技术[0002]鸭新城疫病是由鸭源新城疫病毒(DuckNewcastleDiseasesduckNDV)引起的一类急性、高度接触性和致死性的传染病。早期研究发现，鸭对致病性APMV-1具有极强的抵抗力，仅表现为健康带毒，即使强毒感染也不致病。但近年来发现引起高致病性和死亡性的鸭源新城疫病毒的自然流行，对养鸭业危害严重。河北、福州、浙江、山西、山东、河南等地陆续报道该病的发生和流行，上述研究表明，鸭源新城疫病毒的感染呈上升趋势，将对我国的养鸭业产生巨大危害。[0003]鸭圆环病毒(Duckcircovirus，DuCV)是圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)的一成员，首次在德国报道。近年来，相继有匈牙利、美国、中国台湾及我国山东、辽宁、福