一种多肽片段及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102807612A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102807612A(43)申请公布日2012.12.05(21)申请号201210271177.6A61P5/50(2006.01)(22)申请日2012.08.01A61P3/10(2006.01)(71)申请人中南民族大学地址430074湖北省武汉市洪山区民族大道708号(72)发明人李臣鸿汪俊汉陈正望(74)专利代理机构武汉华旭知识产权事务所42214代理人刘荣(51)Int.Cl.C07K14/47(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/30(2006.01)C07K1/16(2006.01)A61K38/17(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书44页页序列表序列表11页页附图附图33页页(54)发明名称一种多肽片段及其制备方法和用途(57)摘要本发明提供了一种多肽及其制备方法和用途，该多肽为磷脂酰乙醇胺结合蛋白截断后的片段，由其第93～124位的氨基酸残基组成，其氨基酸序列如下：KGNDISSGTVLSDYVGSGPPKGTGLHRYVWLV。本发明还提供了该多肽的制备方法：首先将耐热肠多肽从猪肠道中提取出，然后从耐热肠多肽中提取中粗肽，将粗肽溶于醋酸溶液中制得肽溶液，将肽溶液过柱层析分离得到分离物，选取分离物中具有刺激胰腺分泌胰岛素功能的一份，将其冻干即得粗提取物，将粗提取物进行提纯后即可制得上述多肽。本发明中还提供了上述多肽及其药学上可接受的盐的用途，用于制造刺激胰腺分泌胰岛素的药物。CN102876ACN102807612A权利要求书1/1页1.一种多肽，其氨基酸序列如下：KGNDISSGTVLSDYVGSGPPKGTGLHRYVWLV。2.如权利要求1所述的多肽在生物医药上被认可的经修饰的多肽，其氨基酸序列如下：KGNDISSGTVLSDYVGSGPPKGTGLHRYVWLV。3.如权利要求1所述的多肽的制备方法，其特征在于采用以下步骤：（1）、将猪肠道洗净后浸入沸水中浸泡3～7分钟，浸泡完成后取出冷冻并剁碎，然后在0～10°C条件下用醋酸对肠道进行浸取后过滤得浸出液，用盐酸对浸出液中的浸出物洗脱并抽滤得耐热肠多肽；（2）、将耐热肠多肽溶解于水中，加入抗氧化剂及足量异丙醇溶液，室温下充分静置后离心除去沉淀，然后再加入足量温度为-25℃～-15℃的异丙醇溶液并在-25℃～-15℃条件下充分静置后抽滤去除沉淀，将所得滤液的PH值调节为5.8～6.1，再在-25℃～-15℃条件下充分静置后抽滤得白色沉淀，将白色沉淀充分洗涤后即制得粗肽；（3）、将步骤（2）中制得的粗肽溶解于醋酸溶液中制得肽溶液，将肽溶液过柱层析分离得到分离物，选取分离物中具有刺激胰腺分泌胰岛素功能的一份，将其冻干即得粗提取物；（4）、将粗提取物溶解于碳酸氢铵溶液中并搅拌，离心后去除沉淀得上清液，将所得上清液过柱层析并采用PH值为8.0、浓度为0.02mol/L的碳酸氢铵溶液进行洗涤，洗涤后得到的洗涤物冻干，再将洗涤物经过两次高效液相色谱分离后，将分离物冻干即制得权利要求1所述氨基酸序列的多肽。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中醋酸的浓度为0.5mol/L，盐酸的浓度为0.2mol/L。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中抗氧化剂为硫二甘醇，添加量为1.2毫升；洗涤分两次进行，第一次洗涤选用异丙醇溶液，第二次洗涤选用乙醚溶液，第二次洗涤完成后将白色沉淀放入真空环境中使乙醚在真空中蒸发。6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中的两次高效液相色谱分离中，第一次分离所用洗提液为0.1％的三氟乙酸水溶液，第二次分离所用洗提液为0.1％的三氟乙酸的乙腈溶液。7.权利要求1所述多肽的用途，其特征在于：用于制造刺激胰腺分泌胰岛素的药物。8.权利要求2所述多肽在生物医药上被认可的经修饰的多肽的用途，其特征在于：用于制造刺激胰腺分泌胰岛素的药物。2CN102807612A说明书1/4页一种多肽片段及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明涉及一种磷脂酰乙醇胺结合蛋白截短后的片段，该多肽片段具有刺激分泌胰岛素的作用，本发明同时还提供了上述多肽片段的制备方法。背景技术[0002]磷脂酰乙醇胺结合蛋白（PEBP）是一类能与磷脂酰乙醇胺（PE）结合的蛋白，该家族的所有成员都含有与PE结合的保守区域，PEBP家族种类来源广泛，包括果蝇触觉的气味结合蛋白、盘尾丝吸虫感染后的免疫血清识别的抗原Ag16，酵母中抑制CDC25突变的因子CEN，哺乳动物的体内组织细胞液中。PEBP家族成员功能广泛，涉及到抵抗凋亡，膜形成，精子的成熟等各方面的生理功能。[0003]糖尿