快速纯化富集西马特罗的免疫亲和柱及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103706331103706331A(43)申请公布日2014.04.09(21)申请号201310731559.7C07K16/44(2006.01)(22)申请日2013.12.26C07K16/06(2006.01)C07K17/10(2006.01)(71)申请人南宁市蓝光生物技术有限公司G01N1/34(2006.01)地址530007广西壮族自治区南宁市科园大G01N1/40(2006.01)道68号软件园二期11号楼二层203号申请人广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心广西壮族自治区分析测试研究中心(72)发明人谢体三潘丽金宁欢欢刘晓松吕春秋张兰叶开富萧洁(74)专利代理机构北京中誉威圣知识产权代理有限公司11279代理人彭晓玲(51)Int.Cl.B01J20/22(2006.01)B01J20/30(2006.01)B01D15/38(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书4页说明书4页(54)发明名称快速纯化富集西马特罗的免疫亲和柱及其制备方法和用途(57)摘要本发明公开了一种快速纯化富集西马特罗的免疫亲和柱，由抗西马特罗免疫亲和填料装载入空柱管所得，所述抗西马特罗免疫亲和填料由固相载体和与其偶联的西马特罗特异性多克隆抗体组成；所述的西马特罗特异性多克隆抗体是由西马特罗经重氮法重氮化后与载体蛋白偶联所得的偶联物为免疫原制备抗血清，再用免疫亲和法从抗血清中提纯得到的。本发明还公开了该免疫亲和柱的制备方法和用途。本发明的免疫亲和柱所用抗体特异性高，使用本发明的免疫亲和柱对样品进行前处理，再与色谱法、胶体金试纸条联合使用，可高效、准确检测西马特罗的含量。CN103706331ACN10376ACN103706331A权利要求书1/1页1.一种快速纯化富集西马特罗的免疫亲和柱，由抗西马特罗免疫亲和填料装载入空柱管所得，其特征在于：所述抗西马特罗免疫亲和填料由固相载体和与其偶联的西马特罗特异性多克隆抗体组成；所述的西马特罗特异性多克隆抗体是由西马特罗经重氮法重氮化后与载体蛋白偶联所得的偶联物为免疫原制备抗血清，再用免疫亲和法从抗血清中提纯得到的。2.按照权利要求1所述的免疫亲和柱，其特征在于：所述固相载体为琼脂糖珠。3.按照权利要求2所述的免疫亲和柱，其特征在于：所述琼脂糖珠为经过过碘酸钠氧化的琼脂糖珠。4.按照权利要求1所述的免疫亲和柱，其特征在于：所述载体蛋白为牛血清白蛋白或血蓝蛋白。5.按照权利要求1所述的免疫亲和柱，其特征在于：所述载体蛋白为牛血清白蛋白。6.制备权利要求1～5任一项所述的快速纯化富集西马特罗的免疫亲和柱的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将西马特罗采用重氮法重氮化后偶联于载体蛋白上，制得免疫原，将免疫原免疫动物产生抗血清；（2）将西马特罗偶联到固相载体上制得西马特罗免疫亲和柱，用于从抗血清中纯化提取西马特罗特异性多克隆抗体；（3）将经免疫亲和纯化的西马特罗特异性多克隆抗体与固相载体偶联，制得抗西马特罗免疫亲和填料，将抗西马特罗免疫亲和填料装载入空柱管，即得快速纯化富集西马特罗的免疫亲和柱。7.按照权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的固相载体为琼脂糖珠，所述西马特罗免疫亲和柱的制备方法为：将被过碘酸钠氧化后的琼脂糖珠悬浮于碳酸钠溶液中，再将西马特罗溶解后快速与氧化后的琼脂糖珠混匀，室温反应过夜后，再加入硼氢化钠稳定过夜，即得西马特罗偶联到琼脂糖珠上的填料，将填料装柱，洗去杂质，得到西马特罗免疫亲和柱。8.按照权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤（3）中所述的固相载体为琼脂糖珠，所述快速纯化富集西马特罗的免疫亲和柱的制备方法为：将西马特罗特异性多克隆抗体溶解后和被过碘酸氧化的琼脂糖珠混匀，在室温反应30分钟，然后加入硼氢化钠混匀，在4℃静置30分钟，得到西马特罗特异性多克隆抗体与琼脂糖珠偶联的填料，用蒸馏水清洗未结合的抗体，用磷酸缓冲液清洗填料，清洗4次，每次使用10倍填料体积的磷酸缓冲液，滴干磷酸缓冲液后加入等体积甘油，混匀，得到抗西马特罗免疫亲和填料，将抗西马特罗免疫亲和填料装载入空柱管，每即得快速纯化富集西马特罗的免疫亲和柱。9.权利要求1～5任一项所述的快速纯化富集西马特罗的免疫亲和柱的用途，用于从生物样本中纯化富集西马特罗。2CN103706331A说明书1/4页快速纯化富集西马特罗的免疫亲和柱及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明属于免疫学分离、纯化富集技术领域，涉及一种快速纯化富集西马特罗的免疫亲和柱及其制备方法和用途。背景技术[0002]西马特罗（CIM）属于苯乙胺类药物的一种，属于β-兴奋剂，在医学和兽医临床上主要用于扩张气管和增加肺通气