一种伏马毒素适配体亲和柱及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106596812A(43)申请公布日2017.04.26(21)申请号201710028554.6(22)申请日2017.01.16(71)申请人北京美正生物科技有限公司地址102101北京市延庆县风谷四路8号院2号楼一层（中关村延庆园）(72)发明人张彦明(51)Int.Cl.G01N30/60(2006.01)G01N30/02(2006.01)G01N33/544(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表1页附图1页(54)发明名称一种伏马毒素适配体亲和柱及其制备方法和用途(57)摘要本发明涉及一种伏马毒素适配体亲和柱及其制备方法和用途。该亲和柱利用伏马毒素特异性核酸适配体共价结合在载体上。偶联后的伏马毒素适配体复合载体装填亲和柱。该亲和柱主要用于对于食品、饲料、牛奶、血样以及其他多种样本中的伏马毒素的纯化，以便于后期对样本中伏马毒素的高效液相色谱（HPLC）检测和荧光检测。CN106596812ACN106596812A权利要求书1/1页1.一种伏马毒素的适配体亲和柱，其特征在于包含有载体和伏马毒素适配体。2.根据权利要求1中所述的亲和柱，其特征在于适配体通过化学键偶联在载体上。3.根据权利要求1中所述的亲和柱，其特征在于所述的适配体是核酸适配体，更具体的是寡聚脱氧核苷酸适配体。4.根据权利要求3中所述的核酸适配体，其特征在于所述的适配体序列为序列1所描述的核酸序列。5.根据权利要求1中所描述的适配体，其特征在于适配体是经过化学修饰的适配体。6.根据权利要求5中所描述的适配体，其特征在于修饰方式包括但不限于氨基修饰、羧基修饰、巯基修饰及生物素修饰。7.根据权利要求1中所述的适配体亲和柱，其特征在于所述的载体是琼脂糖凝胶或者化学合成的固相载体。8.根据权利要求5中所述的亲和柱，其特征在于所述的琼脂糖凝胶包含但不限于N-羟基琥珀酰亚胺活化的琼脂糖凝胶、溴化氰活化的琼脂糖凝胶、交联的琼脂糖凝胶、聚丙烯酸琼脂糖凝胶。9.根据权利要求5中所描述的化学合成的固相载体载体，包括但不限于聚苯乙烯，多孔聚苯乙烯及交联多孔聚苯乙烯填料。10.一种纯化伏马毒素适配体亲和柱制备方法，其特征在于选择N-羟基琥珀酰亚胺活化后的载体，将载体干粉用1mmol/L的盐酸浸泡过夜进行活化每克活化的载体加入30-200nmol的适配体，在0.1MNaHCO3，0.5MNaClPH8.3的缓冲液中，室温偶联2小时，或者4℃偶联过夜偶联产物用1MTris.HClPH8.0室温反应2小时偶连好的载体-适配体，用20mMPH7.4的PBS洗涤用含有0.01%硫柳汞的10mMPBSPH7.4洗涤伏马毒素适配体-载体偶联产物，装柱，放于4℃保存。11.一种伏马毒素的适配体亲和柱，其用途在于对待检物中的伏马毒素的富集和纯化。12.根据权利要求11所述的待检物，其特征在于待检物包含但不限于粮食、饲料、牛奶及乳制品、水产、血液、尿液和水。2CN106596812A说明书1/6页一种伏马毒素适配体亲和柱及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明涉及一种伏马毒素适配体亲和柱及其制备方法和用途。属食品安全检测领域。背景技术[0002]伏马毒素(Fumonisins)是一组主要由串珠镰刀菌(Fusariummoniliforme)在一定温度和湿度条件下繁殖所产生的真菌毒素。伏马毒素在自然界中分布广泛,且危害性大,逐渐引起了国内外学者的高度重视。目前,已发现的伏马毒素结构类似物主要分为A、B、C、P四类。研究证实伏马毒素可致马大脑白质软化症(EL-EM),神经性中毒而表现意识障碍、失明和运动失调等症状,严重者甚至造成死亡。对猪造成肺水肿综合征(PPE),并能造成肝脏和食道损伤。伏马毒素还可引起灵长类动物的动脉粥样硬化样改变,诱发大鼠肝癌。与人类食道癌的发生也密切相关。国际癌症研究机构与加利福尼亚环境保护机构已宣布伏马毒素为人类潜在的致癌物质(2B级致癌物)。伏马毒素污染的主要是玉米及其制品,此外还有一些如大米、高粱、小米、牛奶、啤酒等食品。目前世界各地关于伏马毒素污染的报导较多,其中玉米及其制品的污染占了大部分。高含量的伏马毒素在很多国家和地区的玉米及玉米制品中都有报道,如韩国、中国、巴西、尼日利亚、南非、英国、法国和意大利。中国四川、浙江、河南等省份也有伏马毒素污染情况的调查,阳性检出率都较高。有调查在2005年从河南、湖北、广东、四川、广西、吉林等6个省市收集了282份玉米样品进行检测。99.6%的样品表现伏马毒素阳性,平均污染含量为6662ng/g。[0003]基于伏马毒素的污染范围较广,毒性作用也较基于伏马毒素的污染范围较广,毒性作用也较大,许多国家和地区对伏马毒素进行了系统研究。但目前国