一种玉米赤霉烯酮免疫亲和柱及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105771937A(43)申请公布日2016.07.20(21)申请号201610112233.X(22)申请日2016.02.29(71)申请人北京勤邦生物技术有限公司地址102206北京市昌平区回龙观国际信息产业基地高新四街8号(72)发明人罗晓琴冯静万宇平何方洋徐念琴朱亮亮崔海峰齐向武(51)Int.Cl.B01J20/281(2006.01)B01J20/30(2006.01)B01D15/38(2006.01)G01N1/34(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种玉米赤霉烯酮免疫亲和柱及其制备方法和用途(57)摘要本发明公开了一种提取玉米赤霉烯酮的免疫亲和柱。本发明所提供的免疫亲和柱用来提取谷物和饲料中的霉菌毒素玉米赤霉烯酮，包括玉米赤霉烯酮特异性抗体、偶联有玉米赤霉烯酮特异性抗体的CNBractiveSepharose4B、装载亲和材料的塑料管以及保存液。本发明的玉米赤霉烯酮免疫亲和柱使用方便，具有高特异性、可快速提取谷物和饲料中残留的玉米赤霉烯酮。CN105771937ACN105771937A权利要求书1/1页1.一种制备玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的方法，该方法包括下列步骤：a)称取CNBractiveSepharose4B柱料1g，加入1mMHCl溶液10ml，浸泡30min，使之溶胀；b)然后以3000～8000r/min转速离心2～10min分离柱料，用0.1MPH9.0CB缓冲液洗涤溶胀的基质3～5次，每次加入缓冲液10ml，以5000r/min离心10min分离柱料；c)向溶胀好的柱料中加入抗体30mg，再加入0.1MPH9.0CB缓冲液10ml，于37℃条件下150r/min震荡反应1h；d)离心分离柱料，用0.1MPH8.3NaHCO3缓冲液洗柱料3～5次，10ml/次；e)加入含0.5MNaCl的0.1MPH8.0的Tris-HCl溶液10ml于结合有抗体的柱料中，4℃过夜或者37℃，150r/min反应2h封闭未结合位点；f)用含0.5MNaCl的0.1MPH4.0的醋酸钠洗脱液与含0.5MNaCl的0.1MPH8.0的Tris-HCl溶液交替洗涤3～5遍，最终用含0.5MNaCl的0.1MPH8.0的Tris-HCl洗脱液10ml复溶；g)按每支1ml抗体结合凝胶溶液进行装柱，加20％的乙醇保存液，4～8℃，可保存一年以上。2.根据权利要求1所述方法制备的玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，其特征在于，该免疫亲和柱包括偶联有玉米赤霉烯酮特异性抗体的CNBractiveSepharose4B与装载其的塑料管，以及保存液。3.权利要求2所述的玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，其特征在于，其中所述的玉米赤霉烯酮特异性抗体为单克隆抗体。4.权利要求2所述的玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的使用方法，该方法包括以下步骤：a)将亲和柱从2～8℃环境中取出，回温至室温，将免疫亲和柱连接于10ml的注射器下；b)1ml的亲和柱产品需将柱体上方塞子取下，剪掉塞子的下部，再插回亲和柱上连接注射器，3ml的亲和柱产品使用转接头进行连接；c)准确吸取5ml待测液加入到注射器中，使用注射器控制待测液流速为1～2秒每滴通过亲和柱，用5ml去离子水淋洗亲和柱2次，使用注射器控制流速为0.5～1秒每滴，待液体通过后，排干亲和柱内的液体；d)准确吸取1ml甲醇，进行洗脱操作，使用注射器控制流速为2～3秒每滴，收集全部洗脱液，用于分析。5.权利要求2所述的玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的用途，其特征在于，所述用途为提取谷物样品以及饲料样品中的玉米赤霉烯酮残留。6.权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的谷物样品为：玉米、大豆、花生、小麦、大麦、大米。2CN105771937A说明书1/5页一种玉米赤霉烯酮免疫亲和柱及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明属于谷物和饲料中真菌毒素残留检测分析技术领域。具体而言，本发明涉及一种玉米赤霉烯酮的免疫亲和层析柱及其制备方法和用途。背景技术[0002]玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)为一种白色结晶，又称F-2毒素，是由禾谷镰刀菌等菌种产生的有毒代谢产物。1962年Stob等首先从发霉的玉米中分离得到了该毒素，命名为玉米赤霉烯酮。[0003]ZEN主要污染玉米、高粱、小麦、大麦等粮谷类作物及其制品如饲料等。Toshitsugu对19个国家和地区的谷物、食品及饲料中所含的ZEN进行了调查发现，包括中国、阿根廷、加拿大、波兰及也门等众多国家和地区的样品均有不同程度的污染。借助被污染的乳制品、肉制品等动物源性食品，ZEN及其代谢产物可以进入人体，给人类的健康造成威胁。ZEN对动物及人类危害主要表现在影响和破坏生长