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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108918711A(43)申请公布日2018.11.30(21)申请号201810776482.8(22)申请日2018.07.16(71)申请人中国烟草总公司郑州烟草研究院地址450001河南省郑州市高新区枫杨街2号(72)发明人刘萍萍周会娜陈千思罗朝鹏郑庆霞王晨徐国云翟妞金立锋张慧金静静陈霞(74)专利代理机构郑州联科专利事务所(普通合伙)41104代理人时立新(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图1页(54)发明名称一种烟叶中多酚类化合物的检测方法(57)摘要本申请属于烟草代谢组学技术领域,具体涉及一种烟叶中多酚类化合物的检测方法专利申请事宜。该方法利用液相色谱-串联质谱联用仪来实现,可对烟叶中的中山奈酚、花青素、氯化花翠素、鼠李金、绿原酸、飞燕草素葡萄糖苷、原花青素B2、花青素鼠李糖苷、芸香苷和莨菪亭中一种或任意几种同时检测。该方法包括:对预处理后新鲜烟叶进行萃取,制备待检液,液相色谱-串联质谱检测分析等操作。相对于常规的多酚检测分析方法,本申请所提供检测方法具有分析速度快、研究对象多、精密度好、加标回收率高、稳定性良好等优点,因而具有较好的实用价值和推广应用意义。CN108918711ACN108918711A权利要求书1/2页1.一种烟叶中多酚类化合物的检测方法,其特征在于,该方法利用液相色谱-串联质谱联用仪来实现,可对烟叶中的中山奈酚、花青素、氯化花翠素、鼠李金、绿原酸、飞燕草素葡萄糖苷、原花青素B2、花青素鼠李糖苷、芸香苷和莨菪亭中一种或任意几种同时检测;具体包括如下步骤:(一)对预处理后新鲜烟叶进行萃取首先,对待测新鲜烟叶进行预处理,具体而言:先用液氮速冻,冷冻干燥后,再用粉碎机打碎备用;其次,用萃取溶剂对打碎后新鲜烟叶进行萃取;(二)制备待检液分离获得步骤(一)中含有植物多酚的萃取相,冷冻、离心,取上清液冷冻干燥;将冷冻干燥后的样品复溶后离心,取上清液备用待检;(三)液相色谱-串联质谱检测分析液相色谱、质谱条分析时,具体参数参考设置如下:色谱柱:BEHPhenyl色谱柱,柱的规格为:2.1×150mm,1.7μm;色谱检测分析时:柱温,35℃;流动相为:A,含0.1%甲酸的水;B,含0.1%甲酸的甲醇;流速:0.3mL/min;进样量:1μL;梯度洗脱:0~2min:B相由5%升到15%;2min-10min:B相保持15%;10.01min-15min:B相升到100%;质谱检测分析时:离子源:电喷雾离子源,正离子扫描,实时多反应监测(MRM模式,multireactionmonitoring);干燥气温度:290℃;干燥气流量:12L/min;雾化器压力:40psi;鞘气温度:200℃,鞘气流量:11L/min;正离子电离模式下毛细管电压:4kV。2.如权利要求1所述新鲜烟叶中多酚类化合物的检测方法,其特征在于,定量检测分析时,MRM模式下10种植物多酚的特征碎片离子:2CN108918711A权利要求书2/2页。3.如权利要求2所述新鲜烟叶中多酚类化合物的检测方法,其特征在于,以分析物的峰面积与内标峰面积之比Y为纵坐标、标样的浓度X为横坐标进行线性拟合,10种植物多酚的线性方程和相关系数R2、及该方法对10种植物多酚类化合物的检出限为:。4.如权利要求1所述新鲜烟叶中多酚类化合物的检测方法,其特征在于,步骤(一)中,所述萃取溶剂,为乙醇与水混合物,以体积比计,乙醇:水=4~5:1。5.如权利要求1所述新鲜烟叶中多酚类化合物的检测方法,其特征在于,步骤(一)中,萃取时采用超声辅助萃取1~2h。6.如权利要求1所述新鲜烟叶中多酚类化合物的检测方法,其特征在于,步骤(二)中,所述复溶,采用80%乙醇-水溶液作为复溶溶剂。3CN108918711A说明书1/8页一种烟叶中多酚类化合物的检测方法[0001]技术领域[0002]本申请属于烟草代谢组学技术领域,具体涉及一种烟叶中多酚类化合物的检测方法专利申请事宜。背景技术[0003]我国是世界上最大的烟草生产国,烟叶作为高税率产品,其产量与品质直接关系到我国国民经济的发展。烟草成分比较复杂,其中植物多酚类化合物对烟叶产量的提高与品质的保持起着至关重要的作用。[0004]多酚类物质是植物生长发育过程中的一类重要的次生代谢产物。多酚类物质虽然包括很多种,但统计表明,其中芸香苷、绿原酸含量比例最高,绿原酸占总多酚的比例甚至可达75%~90%。就烟草中多酚类物质检测而言,不同烟草品种、不同多酚类化合物的含量参差不齐,有些多酚化合物的含量又过于偏低不易检测,因此选用合适的样品处理方法以及检测方法尤为重要。而准确测