一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109696514A(43)申请公布日2019.04.30(21)申请号201811544051.5(22)申请日2018.12.17(71)申请人云南中烟工业有限责任公司地址650231云南省昆明市红锦路367号(72)发明人宋春满邓乐乐向海英高茜曾婉俐李雪梅陈章玉(74)专利代理机构昆明正原专利商标代理有限公司53100代理人金耀生亢能(51)Int.Cl.G01N30/96(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图1页(54)发明名称一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法(57)摘要本发明涉及一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法，包括如下步骤：配制12种多酚类标准物质的标准溶液、样品处理、样品UPLC-MS-MS分析和计算。本发明方法测定的12种多酚的回收率介于84.7%~102%，相对标准偏差1.9%~5.7%，定量限介于0.5~8.0μg/g之间，该方法灵敏、准确，适用于新鲜烟叶中12种多酚的含量分析。CN109696514ACN109696514A权利要求书1/2页1.一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤（1）、配制12种多酚类标准物质的标准溶液步骤（2）、样品处理准确称取一定量冻干烟叶粉末，加入50%甲醇，超声后离心，取上清液经滤膜过滤后上机分析；步骤（3）、样品UPLC-MS-MS分析分析条件如下：色谱柱：AcquityHSST3柱，2.1×100mm，1.7µm；流动相：A为含0.1%甲酸的水，B为甲醇；洗脱程序：0min10%B，10min25%B，13min100%B，13.5min100%B，14min10%B，16min10%B；流速：0.4mL/min；柱温：30℃；进样量：5μL；质谱电离方式：电喷雾电离模式；监测方式：多反应监测；喷雾电压：3000V；雾化气流速：750L/h；辅助气流速：50L/h；离子源温度：120℃；步骤（4）、计算根据步骤（1）配制的12种多酚化合物不同浓度的混合标准溶液，采用加权回归法，得出各种多酚的工作曲线及其相关系数；对提取后的样品待测液进行测定，测得多酚化合物的定量离子对峰面积，代入标准曲线求得样品中的多酚化合物的含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，12种多酚类标准物质为咖啡酸、阿魏酸、莨菪亭、香豆素、新绿原酸、莨菪苷、山奈酚、山奈酚苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、绿原酸、隐绿原酸和芸香苷，分别称取12种多酚类标准物质0.1g至100mL容量瓶中，精确至0.0001g，用甲醇定容，配制成浓度为1000μg/mL的单一标准储备液。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，移取咖啡酸、阿魏酸、莨菪亭、香豆素4种单一标准储备液各1mL至20mL容量瓶中，用50%体积浓度的甲醇定容，得到浓度为50μg/mL的4种低含量多酚的混合储备液。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，移取新绿原酸、莨菪苷、山奈酚、山奈酚苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷5种单一标准储备液各5mL至50mL容量瓶中，用50%体积浓度的甲醇定容，得到浓度为100μg/mL的5种中等含量多酚的混合储备液。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，移取绿原酸、隐绿原酸、芸香苷3种单一标准储备液各10mL至50mL容量瓶中，用50%体积浓度的甲醇定容，得到浓度为200μg/mL的3种高含量多酚混合储备液。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，准确称取25mg冻干烟叶粉末，加入5mL50%体积浓度的甲醇，超声20min，12000r/min离心5min，取上清液经0.22μm滤膜过滤后上机分析。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，12种多酚化合物的检测参数如表1所示：表1测定的多酚种类及检测参数2CN109696514A权利要求书2/2页。3CN109696514A说明书1/6页一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法技术领域[0001]本发明涉及一种测定多酚类化合物的方法，尤其是一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法。背景技术[0002]多酚类化合物是烟草中含量较丰富的一类物质，在烟草的生长发育、烟叶外观色泽、调制特性、香吃味及烟气生理强度等方面均起着重要作用，是衡量烟草品质的一个重要因素。烟草多酚的含量和氧化程度不仅影响到烟叶的外观质量，也影响烟叶的内在质量。多酚在烟草燃吸时产生微酸性产物，可中和部分烟气碱性，醇和烟气。一些多酚本身具有令人愉快的香气，且在燃吸时裂解产生多种芳香物质，因此多酚类被认为是产生烟草香气的主要成分之一，是烟草中重要的香气前体物。[0003]以往研究