一种唾液酸化TF抗原内酯及其氟代类似物的合成方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109678913A(43)申请公布日2019.04.26(21)申请号201811548160.4(22)申请日2018.12.18(71)申请人天津科技大学地址300457天津市滨海新区经济技术开发区第13大街9号(72)发明人孟欣郁彭董佩杰梁健美(74)专利代理机构天津盛理知识产权代理有限公司12209代理人赵瑶瑶(51)Int.Cl.C07H15/04(2006.01)C12P19/18(2006.01)C12P19/44(2006.01)C07H1/00(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图6页(54)发明名称一种唾液酸化TF抗原内酯及其氟代类似物的合成方法(57)摘要本发明涉及一种唾液酸化TF抗原内酯及其氟代类似物的化学酶法合成方法，其包含下列步骤：(1)酶法合成唾液酸化TF三糖及其氟代类似物；(2)化学法合成唾液酸化TF三糖内酯及其氟代类似物。本发明结合了酶法的立体选择性、高效性和化学法的灵活性，首次实现了唾液酸化TF抗原内酯及其氟代类似物的化学酶法合成，解决了全化学合成唾液酸化TF内酯及其氟代类似物中所面临的合成步骤繁多、总体收率低、立体选择性不高、使用重金属催化等缺点。因此，本发明的在分子探针、拮抗剂及抗肿瘤疫苗中具有重要的应用前景。CN109678913ACN109678913A权利要求书1/2页1.一种唾液酸化TF抗原内酯，其特征在于：结构通式如下：其中：R1，选自氢原子、α-或β-构型丝氨酸残基、α-或β-构型苏氨酸残基、叠氮取代烷基、炔基取代烷基、巯基取代烷基、α-或β-构型取代烷基之一；R2，选自氮乙酰氨基、氮丙酰氨基、氮三氟乙酰胺基、氮叠氮乙酰氨基之一；R3，选自氟原子、羟基之一；R4，选自氟原子、羟基之一；R5，选自氟原子、羟基之一；R6，选自氟原子、羟基之一；R7，选自氟原子、羟基之一；R8，选自氮乙酰氨基、氮丙酰氨基、氮三氟乙酰胺基、氮叠氮乙酰氨基；R9，选自氟原子、羟基之一；R10，选自氟原子、羟基之一；R11，选自氟原子、氢原子、叠氮、羟基之一。2.一种权利要求1所述的唾液酸化TF抗原内酯的合成方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)利用“一锅双酶”法合成唾液酸化TF抗原及其氟代类似物，所述“一锅双酶”法唾液酸化中用到的酶类是指唾液酸CMP-合成酶和唾液酸转移酶；通式II所示的唾液酸化TF抗原及其氟代类似物：其中：R1，选自氢原子、α-或β-构型丝氨酸残基、α-或β-构型苏氨酸残基、叠氮取代烷基、炔基取代烷基、巯基取代烷基、α-或β-构型取代烷基之一；R2，选自氮乙酰氨基、氮丙酰氨基、氮三氟乙酰胺基、氮叠氮乙酰氨基之一；R3，选自氟原子、羟基之一；R4，选自氟原子、羟基之一；2CN109678913A权利要求书2/2页R5，选自氟原子、羟基之一；R6，选自氟原子、羟基之一；R7，选自氟原子、羟基之一；R8，选自氮乙酰氨基、氮丙酰氨基、氮三氟乙酰胺基、氮叠氮乙酰氨基之一；R9，选自氟原子、羟基之一；R10，选自氟原子、羟基之一；R11，选自氟原子、氢原子、叠氮、羟基之一；(2)利用酰化反应将通式Ⅱ所示的化合物进行酰化，合成含有内酯结构的唾液酸化TF抗原内酯及其氟代衍生物,然后把脱除酰基保留内酯结构，得到化合物Ⅰ；3.根据权利要求2所述的唾液酸化TF抗原内酯的合成方法，其特征在于：步骤(1)中的唾液酸化TF抗原及其类似物的合成方法：将TF二糖或氟代衍生物(1.0-5.0当量)、N-乙酰神经氨酸及其类似物(1.0-20.0当量)、CTP(胞苷三磷酸)(1.0-20.0当量)、MgCl2(5.0-100mM)和Tris-HCl缓冲液(10-500mM,pH5.0-10.5)配制水溶液，加入唾液酸CMP-合成酶和一种唾液酸转移酶，实现“一锅双酶”法对受体进行唾液酸化；反应完成后，纯化即可直接获得唾液酸化TF抗原及其氟代类似物。4.根据权利要求2所述的唾液酸化TF抗原内酯的合成方法，其特征在于：所述“一锅双酶”法唾液酸化中用到的酶是NmCSS和PmST1，反应时间为5分钟-30小时。5.根据权利要求2所述的唾液酸化TF抗原内酯的合成方法，其特征在于：所述的酶法合成中反应温度为0-37℃，转速为0-240rpm；所述酶反应的停止方法是向反应中加入等体积的4℃甲醇并在4℃下培育0-30分钟。6.根据权利要求2所述的唾液酸化TF抗原内酯的合成方法，其特征在于：对通式Ⅱ所示的化合物，在冰浴条件下进行酰化反应，其中，使用吡啶为溶剂，10.0-50.0当量的乙酸酐为酰化试剂。7.根据权利要求2所述的唾液酸化TF抗原内酯的合成方法，其特征在于：Zemplén反应操作，在无水甲醇及甲醇钠的条件下，pH值7.5～9.0，温度0-50℃