梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111039976A(43)申请公布日2020.04.21(21)申请号201911366732.1(22)申请日2019.12.26(71)申请人江苏汉斯通药业有限公司地址215500江苏省苏州市常熟市支塘镇窑镇(72)发明人卫耿虎王多平杨宇史加桂夏晓霞(74)专利代理机构苏州诚逸知识产权代理事务所(特殊普通合伙)32313代理人曹孝陈(51)Int.Cl.C07F9/10(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法(57)摘要本发明公开了一种梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法，包括如下步骤：（1）配置待洗脱溶液；（2）程序梯度洗脱；（3）TLC检测含有大豆磷脂酰胆碱的洗脱液；（4）提纯。本发明梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法，以市售纯度为90%的大豆磷脂酰胆碱为原料，以正己烷/异丙醇为流动相，以硅胶层析柱为固定相层析柱，采用梯度洗脱，通过逐步改变流动相中记性溶剂异丙醇的比例，实现对大豆磷脂酰胆碱的有效分离提纯，实现一次纯化将纯度提高到98%以上，纯化效果好，收率高，纯化所得的大豆磷脂酰胆碱能够满足氢化大豆磷脂酰胆碱的质量要求。CN111039976ACN111039976A权利要求书1/1页1.一种梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）配置待洗脱溶液：将纯度为90%的大豆磷脂酰胆碱溶于异丙醇中，得到大豆磷脂酰胆碱溶液，作为待洗脱溶液；（2）程序梯度洗脱：在硅胶层析柱内，以不同体积比混合的A相和B相作为流动相，按照设定的洗脱程序逐步洗脱去除大豆磷脂酰胆碱溶液中的杂质；（3）TLC检测含有大豆磷脂酰胆碱的洗脱液；（4）提纯：将测试合格的洗脱液汇集，蒸除溶剂，所得浓缩物再用有机溶剂洗涤、析晶，干燥，得到纯化的大豆磷脂酰胆碱。2.根据权利要求1所述的梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，纯化后的所述大豆磷脂酰胆碱的纯度为98%以上。3.根据权利要求1所述的梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述大豆磷脂酰胆碱溶液中的大豆磷脂酰胆碱与所述硅胶的质量比为1:30～40。4.根据权利要求3所述的梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述硅胶层析柱内填充的硅胶的目数为300～400目。5.根据权利要求1所述的梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，所述洗脱程序包括12个程序，在第1个程序中，所述A相以10ml/min的流速洗脱15min；在第2和第3个程序中，A相分别以9.5ml/min和9.0ml/min的流速，B相分别以0.5ml/min和1.0ml/min的流速分别洗脱20min；在第4至10个程序中，洗脱时间均为30min，其中，A相的流速在各程序中以0.5ml/min的流速递减，B相的流速在各程序中以0.5ml/min的流速递增，各个程序内，A相的流速和B相的流速不变；在第11个程序中，A相和B相分别以5ml/min的流速洗脱120min；在第12个程序中，B相以10ml/min的流速洗脱30min。6.根据权利要求5所述的梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述A相为正己烷；所述B相为异丙醇。7.根据权利要求1所述的梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述TLC检测的方法为：取活化后的硅胶薄板，并在其上点SPC标准对照样和洗出液样品，在展开剂的作用下展开，晾干后用碘蒸气显色。8.根据权利要求7所述的梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述展开剂为：氯仿、甲醇和水的质量比为65：25：10。9.根据权利要求1所述的梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述步骤（4）中，所述有机溶剂为丙酮；所述洗涤、析晶的方法为：先在50～60℃下保温搅拌1h，再冷却至室温，搅拌3h，过滤，并用丙酮淋洗。10.根据权利要求1所述的梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述步骤（4）中，所述干燥的条件为：真空度-0.08～0.08MPa，温度50～60℃，时间4h。2CN111039976A说明书1/4页梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法技术领域[0001]本发明涉及层析柱纯化物质技术领域，特别是涉及一种梯度法纯化大豆磷脂酰胆碱的方法。背景技术[0002]氢化大豆磷脂酰胆碱，简称HSPC，其作为脂质体药物的重要辅料，纯度要求在98%以上。氢化大豆磷脂酰胆碱的制备工艺由原料大豆磷脂酰胆碱（简称SPC）经过催化氢化还原成饱和的产物。由于对氢化大豆磷脂酰胆碱的产品质量要求较高，因此工艺上就必须采用纯度较高的原料大豆磷脂酰胆碱（SPC）。因此，制备得到98%以上纯度的大豆磷脂酰胆碱对于制备符合纯度要求的氢化大豆磷脂酰胆碱至关重