一种分离纯化二亚油酰磷脂酰胆碱的方法和二亚油酰磷脂酰胆碱产品.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112979694A(43)申请公布日2021.06.18(21)申请号202110225153.6(22)申请日2021.03.01(71)申请人武汉轻工大学地址430023湖北省武汉市汉口常青花园学府南路68号(72)发明人张维农刘思敏从艳霞齐玉堂(74)专利代理机构北京思创大成知识产权代理有限公司11614代理人赵爽(51)Int.Cl.C07F9/10(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种分离纯化二亚油酰磷脂酰胆碱的方法和二亚油酰磷脂酰胆碱产品(57)摘要本发明属于磷脂加工领域，具体涉及一种分离纯化二亚油酰磷脂酰胆碱的方法和二亚油酰磷脂酰胆碱产品。该方法包括：(1)上样溶液制备：将高纯度磷脂酰胆碱溶解于低碳醇中，获得样品溶液；(2)分离纯化：对样品溶液采用反相柱系统进行分离纯化，然后进行洗脱，收集洗脱液，再将洗脱液进行低脂脱溶，得到所述二亚油酰磷脂酰胆碱产品。本发明中DLPC含量大幅提高，其纯度从30％提高至90％以上，其回收率高于70％；本发明采用低碳醇或低碳醇水溶液作为洗脱剂，便于回收利用，工艺绿色环保；本发明采用制备色谱柱进行分离纯化，分离能力强，重复性好，操作简单可控，易于实现工业化生产。CN112979694ACN112979694A权利要求书1/1页1.一种分离纯化二亚油酰磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，该方法包括：(1)上样溶液制备：将高纯度磷脂酰胆碱溶解于第一低碳醇中，获得样品溶液；(2)分离纯化：对样品溶液采用反相柱系统进行分离纯化，然后进行洗脱，通过紫外在线检测器在203nm波长下对洗脱液进行检测，收集检测出含有二亚油酰磷脂酰胆碱的洗脱液，再将洗脱液进行低脂脱溶、干燥，得到所述二亚油酰磷脂酰胆碱产品；所述分离纯化采用的洗脱剂为第二低碳醇或低碳醇水溶液，所述洗脱剂中低碳醇与水的体积比为1：0～1；洗脱时洗脱液的流速为0.1～0.6bv/min；相对于反相柱系统中的填料，高纯度磷脂酰胆碱的量为0.1～10wt％。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述高纯度磷脂酰胆碱中磷脂酰胆碱的含量为90～95wt％，二亚油酰磷脂酰胆碱的含量为28～36wt％。3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，所述高纯度磷脂酰胆碱与所述低碳醇的料液比为(0.8‑8g)：1mL。4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一低碳醇选自甲醇、乙醇和异丙醇中的至少一种。5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第二低碳醇选自甲醇、乙醇和异丙醇中的至少一种。6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述反相柱系统以C18填料为固定相，所述C18填料的粒径为20‑35μm，孔径为质量为35‑45g。7.由权利要求1‑6中任意一项所述的方法制备的得到的分离纯化后的二亚油酰磷脂酰胆碱产品。8.根据权利要求7所述的二亚油酰磷脂酰胆碱产品，其中，所述二亚油酰磷脂酰胆碱产品中二亚油酰磷脂酰胆碱的纯度大于90％。2CN112979694A说明书1/5页一种分离纯化二亚油酰磷脂酰胆碱的方法和二亚油酰磷脂酰胆碱产品技术领域[0001]本发明属于磷脂加工领域，更具体地，涉及一种分离纯化二亚油酰磷脂酰胆碱的方法和二亚油酰磷脂酰胆碱产品。背景技术[0002]二亚油酰磷脂酰胆碱(DLPC)是大豆中卵磷脂(PC)的主要活性成分，它是多烯磷脂(PPC)中的主要分子种类，具有非常重要的生物学功能。多烯磷脂酰胆碱约含40～52％为二亚油酰磷脂酰胆碱(DLPC)，JaimePoniaChik等研究提出DLPC可能是预防纤维化，抑制肝星状细胞激活的原因，且DLPC具有抗氧化作用，通过减少脂质过氧化产物的形成，减少在体外诱导脂质过氧化的细胞损伤。KhursheedP.Navder等研究证明DLPC具有抗氧化作用，可显著保护人低密度脂蛋白免受铜或自由基引发剂产生的体外氧化。[0003]目前，国内外纯化制备磷脂酰胆碱的技术较为成熟，制备大类磷脂(磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸和磷脂酰胆碱等)多采用硅胶或者三氧化二铝正向填料柱进行分离。宋华等采用硅胶柱从大豆卵磷脂粗品中纯化制备获得纯度大于95％的磷脂酰胆碱。曹栋等选用三氧化二铝作为柱层析填料制备磷脂酰胆碱，纯度可达91％。在分离制备磷脂酰胆碱的同时DLPC的含量得到了一定提升，但其含量仍低于40％，因此，发明出更高效和绿色环保的分离方法是制备高纯度DLPC有效的解决方法。[0004]国内外关于DLPC的研究多集中在磷脂及磷脂酰胆碱分子种类的高效液相检测方法和营养功能上，对特异性磷脂分子(如二亚油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱这类具有特定脂肪酰种类和位置的磷脂分子)的分离纯化以及合成相关报道较少。以柱层析法分离制备特异性磷脂分子