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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111548383A(43)申请公布日2020.08.18(21)申请号202010531198.1(22)申请日2020.06.11(71)申请人湖南和泰康瑞生物技术有限公司地址410000湖南省长沙市高新开发区青山路662号芯城科技园14栋1005房(72)发明人潘永峰周惠潘善庆(74)专利代理机构长沙惟盛赟鼎知识产权代理事务所(普通合伙)43228代理人姚亮梅(51)Int.Cl.C07H19/048(2006.01)C07H1/00(2006.01)权利要求书2页说明书10页附图5页(54)发明名称一种β-烟酰胺单核苷酸的工艺制备方法(57)摘要本发明提供一种β-烟酰胺单核苷酸的工艺制备方法,以四乙酰核糖和烟酸胺或烟酸乙酯为起始物料,经缩合、氨解、化学拆分和磷酸化等主要工艺步骤,通过优化工艺方法,制备得到β-烟酰胺单核苷酸,本发明基于β-烟酰胺单核苷酸的质量控制、安全性、制备工艺的工业化批量生产可行性等目的,在原有工艺路线基础上做出改进,对所选物料和试剂、物料量的控制等方面做出优化,相对于原有制备工艺,使其具有操作简单、易工艺放大、收率较高、最终产品质量可控和安全性可控等的优点。CN111548383ACN111548383A权利要求书1/2页1.一种β-烟酰胺单核苷酸的工艺制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、缩合:以四乙酰核糖、烟酸胺或烟酸乙酯做为起始物料,在溶剂中经催化剂作用进行缩合反应得到含有烟酸乙酯三乙酰核苷或烟酰胺三乙酰核苷的溶液;S2、氨解和脱保护:将步骤S1中含有烟酸乙酯三乙酰核苷的溶液先通入氨气进行氨解,再加入有机碱脱去乙酰基,含有烟酰胺三乙酰核苷的溶液直接加入有机碱脱去乙酰基,反应结束后经处理得到中间体烟酰胺核糖;S3、化学拆分:中间体烟酰胺核糖为消旋体,在溶剂中经化学试剂拆分、重结晶、除盐后得到β-烟酰胺核糖;S4、磷酸化:将步骤S3中经拆分得到的β-烟酰胺核糖在溶剂中经三氯氧磷磷酸化后,先经有机溶剂萃取除杂,除杂后的水层再过离子交换树脂除盐,最后水溶液冻干得到β-烟酰胺单核苷酸。2.根据权利要求1所述的一种β-烟酰胺单核苷酸的工艺制备方法,其特征在于,所述步骤S1中:a)催化剂为TMSCl、TMSBr、TMsOTf中的任意一种;b)物料摩尔比,四乙酰核糖:烟酸胺或烟酸乙酯:催化剂为1:1:0.1~1:1.1:0.1;c)反应溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈中任意一种;d)溶剂与四乙酰核糖的体积质量比为3~5ml/g;e)缩合反应温度为0℃~25℃,催化剂加入温度为0℃~5℃;f)缩合反应时间以TLC监控四乙酰核糖消失为止,为12h~14h。3.根据权利要求2所述的一种β-烟酰胺单核苷酸的工艺制备方法,其特征在于,反应结束后,控温0℃~5℃加入0.2~0.3当量的三乙胺用于完成破坏催化剂的淬灭反应。4.根据权利要求1所述的一种β-烟酰胺单核苷酸的工艺制备方法,其特征在于,所述步骤S2中:a)烟酸乙酯三乙酰核苷氨解温度为-5℃~5℃,氨解时间以TLC监控烟酸乙酯三乙酰核苷消失为止,为1h~1.5h;b)脱保护的有机碱为乙醇钠或甲醇钠的中任意一种,溶剂为乙醇或甲醇,溶解后加入反应液中,溶剂与有机碱的体积质量比为10ml/g;c)烟酸乙酯三乙酰核苷和烟酰胺三乙酰核苷与有机碱的摩尔比均为1:2~1:3;d)烟酸乙酯三乙酰核苷和烟酰胺三乙酰核苷脱保护反应温度均为-5℃~5℃;e)烟酸乙酯三乙酰核苷脱保护反应时间以TLC监控烟酸乙酯三乙酰核苷消失为止,为1h~1.5h;烟酰胺三乙酰核苷脱保护反应时间以TLC监控烟酰胺三乙酰核苷消失为止,为1h~2h。5.根据权利要求4所述的一种β-烟酰胺单核苷酸的工艺制备方法,其特征在于,反应完,反应液中先加入1mol/L盐酸淬灭多余的有机碱,控制pH为5~6,再加入甲基叔丁基醚、异丙醇和叔丁醇中任意一种搅拌析晶,析晶温度为-5℃~5℃。6.根据权利要求1所述的一种β-烟酰胺单核苷酸的工艺制备方法,其特征在于,所述步骤S3中:a)化学试剂为(S)-(-)-alpha-甲苄基异氰酸酯;b)烟酰胺核糖与拆分化学试剂(S)-(-)-alpha-甲苄基异氰酸酯摩尔比为1:1~1:1.5;2CN111548383A权利要求书2/2页c)溶剂为甲醇与水的混合溶剂,甲醇与水体积比为2:1~1:1,溶剂与烟酰胺核糖的体积质量比为10ml/g;d)拆分条件:加热回流后冷却析晶,重复此操作3~4次。7.根据权利要求6所述的一种β-烟酰胺单核苷酸的工艺制备方法,其特征在于,得到的β-烟酰胺核糖的(S)-(-)-alpha-甲苄基异氰酸酯盐用甲醇与水的混合溶剂再重结晶一次后,将其加入乙酸乙酯或二氯甲烷中,并加入1mol/