一种工业发酵生产辅酶Q10的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111763636A(43)申请公布日2020.10.13(21)申请号202010539816.7(22)申请日2020.06.15(71)申请人神舟生物科技有限责任公司地址010206内蒙古自治区呼和浩特市托克托县工业园中牧路2号(72)发明人韩祎君巴国政张玉东弓吉龙刘艳新王瑞霞(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)C12P7/66(2006.01)C12R1/01(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图2页(54)发明名称一种工业发酵生产辅酶Q10的方法(57)摘要本发明涉及一种辅酶Q10的制备方法，具体涉及一种工业发酵生产辅酶Q10的方法。其采用菌种为类球红细菌，工艺过程包括菌种的平板培养、菌种的斜面培养、20L种子培养、一级种子罐培养、二级种子培养、三级发酵培养、倒种再培养发酵。本发明解决发酵液中培养基消耗不完全且杂质含量高，有效单位低，导致提炼收率低，且工业盐质量不容易控制，低单位菌丝多造成低产量高排污，排放物中未利用的有机物多造成COD排放超标，从而增加了环保成本的问题。本发明工艺流程简单、染菌风险低，节约发酵成本、提升发酵产量，增加工艺储备，增加排产。CN111763636ACN111763636A权利要求书1/2页1.一种工业发酵生产辅酶Q10的方法，其特征在于，采用菌种为类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)，已于2018年10月24日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号为CGMCCNo.16625；所述方法包括如下步骤：S1：菌种的平板培养：将菌种接种于平板，放入温度32.0±0.5℃、湿度35%-45%的培养箱中培养5-7天；S2：菌种的斜面培养；从S1中选择培养成熟的菌种，放入温度32.0±0.5℃、湿度35%-45%的培养箱中培养，培养周期为5-7天；S3：20L种子培养；从S2中选择斜面培养成熟的菌种，放入灭菌后的20L种子罐中，培养条件为0-12h转速控制60~80rpm，13h后转速为160~200rpm，空气流量为0.6±0.23m/h，温度32.0±1℃，培养22~30h；S4：一级种子罐培养：待S3中种子液培养成熟后利用压差法按接种量0.1～0.5％接入一级种子罐中，一级种子罐培养条件为罐压0.03～0.05MPa，通气量100±20m3/h，罐温为32～34℃，转速180～200rpm，培养周期24～32h；S5：二级种子培养：将S4中培养成熟的一级种子液利用压差法按接种量8～20％接入二级种子罐中，二级种子罐培养条件为罐压0.03～0.05MPa，通气量400±200m3/h，罐温为32～34℃，转速120～160rpm，培养周期18～26h；S6：三级发酵培养：将S5中培养成熟的二级种子液利用压差法按接种量20～30％接入三级发酵罐中，三级发酵罐培养条件为罐压0.03～0.05MPa，发酵前40h通气量控制800±200m3/h，40h后至结束通气量控制1000±200m3/h，转速控制80～100rpm，罐温为32～34℃，发酵过程需要进行3次补料；S7：倒种再培养发酵：选取S6中培养至50~65h符合纯种培养标准的1批或1批以上给出罐发酵液，将其转入同一个灭菌完成的接收罐中继续培养，接收罐的罐压0.03～0.05MPa，发酵前40h通气量控制800±200m3/h，40h后至结束通气量控制1000±200m3/h，转速控制80～100rpm，罐温为32～34℃，发酵过程需要进行3次补料。2.根据权利要求1所述的工业发酵生产辅酶Q10的方法，其特征在于：所述S1平板培养和S2斜面培养所用的培养基配方为：酵母粉1.0-10.0g/L，磷酸二氢钾0.1-2.5g/L，硫酸镁1.0-5.0g/L，硫酸亚铁0.1-1.0g/L，氯化钠0-5.0g/L，硫酸铵1.5-3.5g/L，谷氨酸钠0.5-3.0g/L，玉米浆干粉0.5-3.0g/L，葡萄糖5-20g/L，琼脂15-20g/L，pH=6.5-7.3。3.根据权利要求1所述的工业发酵生产辅酶Q10的方法，其特征在于：所述S3中20L种子培养的培养罐培养基配方为：葡萄糖30-60g/L，硫酸铵10-30g/L，玉米浆干粉5-10g/L，谷氨酸钠1-10g/L，一水硫酸镁0.1-0.5g/L，酵母浸粉5-20g/L，工业盐15-30g/L，磷酸氢二钾5-10g/L，磷酸二氢钾5-10g/L，七水硫酸镁10-30g/L，七水硫酸亚铁1-10g/L，pH=6.5-7.3。4.根据权利要求1所述的工业发酵生产辅酶Q10的方法，其特征在于：所述S4中一级种子罐培养基配方为：葡萄糖0.1-0.4