一种辅酶Q10的发酵提取方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115584357A(43)申请公布日2023.01.10(21)申请号202211359776.3C07C46/10(2006.01)(22)申请日2022.11.02C07C50/28(2006.01)C12R1/01(2006.01)(71)申请人广东润和生物科技有限公司地址510800广东省广州市花都区绿地空港七街3号（自编3栋）405房（空港花都）(72)发明人唐林志吕思敏石爱云莫新宝何耀文程凤森(74)专利代理机构广州瑞之凡知识产权代理事务所(普通合伙)44514专利代理师黄爱君(51)Int.Cl.C12P7/66(2006.01)C12N1/20(2006.01)C12N1/02(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种辅酶Q10的发酵提取方法(57)摘要本发明提供了一种辅酶Q10的发酵提取方法。经证明，该方法中采用玉米淀粉和玉米浆分别替代传统发酵培养基中的碳源和氮源，可明显提高辅酶Q10的产量，同时，采用异丙醇作为提取溶剂时，可进一步提高辅酶Q10的提取效果。相比于其他碳源和氮源而言，玉米淀粉和玉米浆具有成分低廉、高收率等优点。渗漉提取法具有工艺简单、操作方便、易放大生产等优势。CN115584357ACN115584357A权利要求书1/1页1.一种辅酶Q10的发酵提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将球状红杆菌菌株活化后接种于种子培养基中，以180‑220转/分钟的转速于28‑35℃摇床培养20‑30小时，得到种子液；(2)将种子液以8‑15％的接种量转接至发酵培养基中，以280‑320转/分钟的转速于28‑35℃摇床发酵培养100‑150小时，得到发酵液，发酵过程中向发酵液中通入无菌空气，无菌空气的通气比为25‑35L/min；其中，所述在发酵培养基中采用玉米淀粉和玉米浆分别作为碳源和氮源；(3)将发酵液以7000‑9000转/分钟的转速离心20‑40分钟，收集底部固体，将底部固体用去离子水洗涤，得到菌体；(4)采用渗漉提取法从菌体中提取辅酶Q10，从柱顶连续加入提取溶剂，控制流速2.0‑3.0mL/min，直至收集的渗漉液体积为500mL；重复多次收集足够的渗漉液作为后续操作的原料液；其中，所述提取溶剂为异丙醇；(5)合并渗漉液，以旋转蒸发仪减压浓缩；将浓缩混合液经硅胶柱层析纯化和薄层色谱鉴定，鉴定后进行结晶处理，并采用HPLC进行定量分析，并计算其产量。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述种子培养基的组成为：NaCl2g/L，K2HPO41.3g/L，KH2PO40.5g/L，MgSO40.125g/L，FeSO40.1g/L，葡萄糖3g/L，酵母浸粉8g/L，调节培养基pH至7.0。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基的组成为：MgSO46.3g/L，KH2PO43g/L，NaCl2g/L，CaCO32g/L，谷氨酸钠3g/L，玉米淀粉40g/L，玉米浆4g/L，调节培养基pH至7.0。2CN115584357A说明书1/4页一种辅酶Q10的发酵提取方法技术领域[0001]本发明属于生物制药领域，涉及一种发酵法生产辅酶Q10的提取纯化方法。背景技术[0002]辅酶Q10(C0enzymeQl0，CoQl0)，又名泛醌(Ubiquinone)，是一类脂溶性醌类化合物，是细胞线粒体内最重要的辅酶之一。作为真核细胞有氧呼吸链的重要构成成分，作为激活剂作用于细胞代谢和细胞呼吸，对机体内的新陈代谢过程具有促进作用，提高机体非特异性免疫、清除自由基、增强抗氧化能力、稳定细胞膜结构、抑制细胞凋亡、延缓衰老和保护心脏等多重功效，广泛应用于医疗、膳食补充、保健品、化妆品等领域。[0003]相关研究预计在未来十年期间，辅酶Q10的市场需求的年复合增长率将达到20％以上。中国对辅酶Q10的开发利用比较晚，其主要消费市场在欧美。随着辅酶Q10医疗保健功效被中国大众了解，国内需求开始激增。[0004]目前，国内生产辅酶Q10的来源除天然来源外，还包括化学合成、植物细胞培养以及微生物发酵法等。天然来源中辅酶Q10的含量相对较低，提取成分相对较高；而化学合成方法反应复杂、步骤多，且副产物多，生产成本也比较高；相比之下，微生物发酵生产辅酶Q10一直备受业内关注，主要的研发重点也多集中在：高产菌株的构建、筛选，优化菌株的培养条件，开发适合合适的前体物质促进辅酶Q10的生物合成，优化发酵生产工艺，优化分离纯化工艺等方面。利用微生物发酵生产辅酶Q10则具有以下优势：1、发酵产物为天然品，生物活性好，易被人体吸收；2、没有原材料的制约，适合工业化生产。但是目前，现有的从发酵液中提取、纯化辅酶Q10的工艺