一种辅酶Q10的发酵方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111996219A(43)申请公布日2020.11.27(21)申请号202011030403.2C12R1/01(2006.01)(22)申请日2020.09.27(71)申请人华北制药股份有限公司地址052165河北省石家庄市经济技术开发区扬子路18号(72)发明人段志钢王平尹贵超王成王淑琳张军剪王云牛霄亮李景李默晗高雨宁丁宝娟(74)专利代理机构北京达友众邦知识产权代理事务所(普通合伙)11904代理人徐银辉(51)Int.Cl.C12P7/66(2006.01)C12N1/38(2006.01)C12N1/20(2006.01)权利要求书2页说明书7页(54)发明名称一种辅酶Q10的发酵方法(57)摘要本发明公开了一种辅酶Q10的发酵方法，属于微生物发酵领域，方法中分周期控制铵离子浓度，发酵培养基中添加赖氨酸盐并且在发酵过程中再次补入赖氨酸盐，发酵过程中补加一次硫酸钠。该发酵控制工艺使辅酶Q10产生菌的生长和代谢能力明显增强，菌体量明显增加，辅酶Q10发酵单位增长快，辅酶Q10放罐效价达到4000mg/L以上，发酵周期明显延长，菌体容易过滤收集，辅酶Q10的批产量大幅增加，明显降低了辅酶Q10的发酵成本。CN111996219ACN111996219A权利要求书1/2页1.一种辅酶Q10的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：1)母瓶培养：将辅酶Q10生产菌种稀释至1000-1200个/mL后接种0.5mL至斜面培养基上，将斜面培养基置于温度为30-34℃，相对湿度为40％-60％的培养箱中培养4-8d后，挑取2-5个菌落接种于母瓶培养基中，将母瓶培养基置于30-34℃，相对湿度为40％-60％，转速为200-250rpm的摇床中培养24-32h，得到母瓶菌种；2)一级种子罐培养：将母瓶菌种按1-5‰的接种量接种至一级种子罐中的培养基，在30-35℃，罐压0.03-0.05MPa，通气比0.3-0.6，搅拌转速140-180rpm，培养28-36h，得到葡萄糖残量0.5-1.0g/L，菌体形状均一，无菌良好的一级种子液；3)二级种子罐培养：将一级种子液按8-15％的接种量接种至二级种子罐中的培养基，在30-35℃，罐压0.03-0.05MPa，通气比0.4-0.7，搅拌转速120-160rpm，培养16-24h，得到葡萄糖残量0.4-0.8g/L，菌体形状均一，无菌良好的二级种子液；4)发酵罐培养：将二级种子液按15-25％的接种量接种至发酵罐中的培养基，在32-35℃，罐压0.03-0.06MPa，通气比0.6-0.8，搅拌转速110-140rpm，培养至菌体消耗葡萄糖速率明显下降，菌体部分自溶时终止发酵；发酵罐培养过程中连续补入浓度为50-60％的葡萄糖溶液，使发酵罐中葡萄糖残量控制在8-15g/L；培养过程中连续补入浓度为13-16％的磷酸二氢钾溶液，使发酵罐中磷残量控制在0.15-0.25g/L；培养过程中连续补入浓度为18-22％的氨水，使发酵罐中的pH值控制在6.5-7.0；所述发酵罐培养的操作中，还包括补加铵盐水溶液的操作；所述发酵罐培养的操作中，还包括补加赖氨酸盐水溶液的操作；所述发酵罐培养的操作中，还包括补加硫酸盐水溶液的操作。2.根据权利要求1所述的辅酶Q10的发酵方法，其特征在于，所述铵盐水溶液为硫酸铵、氯化铵、碳酸铵或碳酸氢铵的水溶液，所述铵盐水溶液的浓度为5％-80％；所述赖氨酸盐水溶液为赖氨酸盐酸盐、赖氨酸硫酸盐或赖氨酸磷酸盐的水溶液，所述赖氨酸盐水溶液的浓度为1％-30％；所述硫酸盐水溶液为硫酸钠或硫酸钾的水溶液，所述硫酸盐水溶液的浓度为10％-60％。3.根据权利要求1或2所述的辅酶Q10的发酵方法，其特征在于，所述铵盐水溶液的补加方式为：发酵周期1-20h时，补加至发酵罐中铵离子浓度0.8-1.2g/L；发酵周期21-40h时，补加至发酵罐中铵离子浓度1.2-1.6g/L；发酵周期41-65h时，补加至发酵罐中铵离子浓度1.6-2.0g/L；发酵周期66-80h时，补加至发酵罐中铵离子浓度1.2-1.6g/L；发酵周期81h-放罐时，补加至发酵罐中铵离子浓度0.6-1.2g/L。4.根据权利要求1或2所述的辅酶Q10的发酵方法，其特征在于，所述赖氨酸盐水溶液的补加方式为：发酵周期20-28h时，补加至发酵罐中赖氨酸盐浓度为0.01-0.1g/L；发酵周期40-48h时，补加至发酵罐中赖氨酸盐浓度为0.04-0.12g/L；发酵周期60-68h时，补加至发酵罐中赖氨酸盐浓度为0.005-0.05g/L。5.根据权利要求1或2所述的辅酶Q10的发酵方法，其特征在于，所述硫酸盐水溶液的补加方式为：发酵周期36-70