一种达托霉素的纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113004373A(43)申请公布日2021.06.22(21)申请号201911317729.0(22)申请日2019.12.19(71)申请人鲁南制药集团股份有限公司地址276006山东省临沂市红旗路209号(72)发明人张贵民郭朝江史新强朱兵峰(51)Int.Cl.C07K7/08(2006.01)C07K1/20(2006.01)C07K1/18(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/36(2006.01)权利要求书1页说明书9页(54)发明名称一种达托霉素的纯化方法(57)摘要本发明属于生物医药技术领域，具体公开一种达托霉素的纯化方法。包括如下步骤：1)陶瓷膜过滤达托霉素发酵液；2)疏水树脂层析；3)离子交换树脂层析；4)疏水树脂层析除盐、除内毒素；5)纳滤浓缩；6)冷冻干燥。本发明所提供达托霉素的纯化方法，操作简单，步骤短，生产周期短，产品收率高，达托霉素纯度高，有利于规模化生产。CN113004373ACN113004373A权利要求书1/1页1.一种达托霉素的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)陶瓷膜过滤达托霉素发酵液；(2)疏水树脂层析；(3)离子交换树脂层析；(4)疏水树脂层析除盐、除内毒素；(5)纳滤浓缩；(6)冷冻干燥。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的疏水树脂为XR3SP树脂或XR30SP树脂。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的疏水树脂层析步骤包括树脂柱平衡，上样，梯度冲洗过程；梯度冲洗过程为上样结束后用含有乙酸钠的乙腈水溶液梯度冲洗。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的梯度冲洗过程如下：先用pH4.0～4.5含3～4g/L乙酸钠的15～20％乙腈水溶液洗涤，然后再用pH5.0～5.5含3～4g/L乙酸钠的15～20％乙腈水溶液洗涤，最后用pH5.5～6.0含3～4g/L乙酸钠的25～30％乙腈水溶液洗脱；收集含达托霉素的洗脱流出液。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的离子交换树脂为NQ-M树脂。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的离子交换树脂层析过程包括树脂柱平衡，上样，梯度冲洗过程；梯度冲洗过程为上样结束后用含乙酸钠的氯化钠溶液梯度冲洗。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述梯度冲洗过程为先用pH5.0～5.5含1.5～2.0g/L乙酸钠的1.2～3g/L氯化钠溶液洗涤，然后用pH5.0～5.5含1.5～2.0g/L乙酸钠的4～8g/L氯化钠溶液洗脱；收集含达托霉素的洗脱流出液。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述疏水树脂为XR30SP树脂。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)包括将步骤(3)所得收集液调pH2.6～3.6，上样疏水树脂柱，上样结束后用10～20％乙醇溶液洗涤，再用75～85％乙醇溶液进行洗脱，收集含达托霉素的洗脱流出液。10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)是采用聚醚砜纳滤膜进行纳滤浓缩，纳滤膜截留分子量为200～1000道尔顿。2CN113004373A说明书1/9页一种达托霉素的纯化方法技术领域[0001]本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种达托霉素的纯化方法。背景技术[0002]达托霉素是从玫瑰孢链霉菌发酵液中提取得到的环脂肽类物质，最初是由美国Lily公司于80年代开发，1997年11月，Lily公司将达托霉素的全球独家开发、生产及销售权转让给Cubist制药公司，2003年9月12日，FDA首次批准Cubicin(Daptomycin注射剂)上市。它是获准上市的首个环脂肽类抗生素药物，用于治疗由一些革兰氏阳性敏感菌株引起的并发性皮肤及皮肤结构感染。2006年达托霉素在澳大利亚，德国，荷兰，西班牙，英国上市，2007年在瑞士上市。随后在加拿大，韩国，欧盟等10多个国家注册。2006年3月美国FDA又批准；达托霉素的新的适应症——用于治疗对甲氧西林敏感的金葡菌(MSSA)或耐甲氧西林金葡菌(MRSA)性菌血症及其引起的右侧心内膜炎。[0003]2000年Pfizer公司研发的利奈唑烷(linezolid)，作为近四十年开发的仅有两类新结构抗生素之一，上市不到一年就出现交叉耐药菌的报道。而达托霉素具有可以赋予其临床优势的数项独特性质。首先，达托霉素的作用机制与现已上市的各类抗菌药物都不相同，这意味着达托霉素将不会受到来自其他抗生素所致交叉耐药性的影响，达托霉素作为应用到临床的首个环脂肽类抗生素，至今尚未有交叉耐药菌的报道，临床耐药菌株的出现几率极低(＜0.2％)。其次，达托霉素已经显现能在体外迅速抑