达托霉素的提纯方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112979756A(43)申请公布日2021.06.18(21)申请号201911285500.3(22)申请日2019.12.13(71)申请人浙江昌海制药有限公司地址312500浙江省绍兴市滨海新城致远中大道188号申请人浙江医药股份有限公司新昌制药厂(72)发明人章槐东李恩民孙新强(74)专利代理机构北京康信知识产权代理有限责任公司11240代理人白雪(51)Int.Cl.C07K7/08(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/20(2006.01)权利要求书3页说明书11页(54)发明名称达托霉素的提纯方法(57)摘要本发明提供了达托霉素的提纯方法。该方法包括：S1，达托霉素中间体料液初步纯化，用第一纳滤膜进行第一次浓缩；S2，将第一浓缩液的pH调至4.0～8.0，上入装有单分散聚合物填料的层析柱第一次吸附；洗脱，得到第一洗脱液；S3，采用第二纳滤膜对第一洗脱液进行第二次浓缩；S4，将第二浓缩液上入装有反相硅胶填料的制备柱中吸附；洗脱，得到第二洗脱液；S5，采用第三纳滤膜对第二洗脱液进行第三次浓缩；S6，将第三浓缩液进行超滤膜脱色和去内毒素，用第四纳滤膜进行第四次浓缩，得到第四浓缩液；S7，调节第四浓缩液pH至3.0～6.0，冻干，得到成品。将该方法用于提取达托霉素，具有更高的产品纯度和纯化收率。CN112979756ACN112979756A权利要求书1/3页1.一种达托霉素的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，对达托霉素中间体料液进行初步纯化，然后用第一纳滤膜进行第一次浓缩，得到第一浓缩液；S2，将所述第一浓缩液的pH值调节至4.0～8.0，然后将其上入装有单分散聚合物填料的层析柱进行第一次吸附，得到第一吸附柱；洗脱所述第一吸附柱，得到第一洗脱液；S3，采用第二纳滤膜对所述第一洗脱液进行第二次浓缩，得到第二浓缩液；S4，将所述第二浓缩液上入装有反相硅胶填料的制备柱中进行吸附，得到第二吸附柱；洗脱所述第二吸附柱，得到第二洗脱液；S5，采用第三纳滤膜对所述第二洗脱液进行第三次浓缩，得到第三浓缩液；S6，将所述第三浓缩液进行超滤膜脱色和去内毒素，然后再用第四纳滤膜进行第四次浓缩，得到第四浓缩液；S7，调节所述第四浓缩液的pH值至3.0～6.0，然后经冻干，得到达托霉素成品。2.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述单分散聚合物填料的材料选自PS、PSA、PSN中的一种或多种，且所述单分散聚合物填料的粒径为10～50μm，孔径为100～300埃；优选地，所述单分散聚合物填料的材料选自PS和/或PSA，且所述单分散聚合物填料的粒径为30μm，孔径为300埃。3.根据权利要求2所述的提纯方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述调节pH后的所述第一浓缩液在所述层析柱中的上柱量为所述层析柱体积2～10％，优选为3～6％。4.根据权利要求2所述的提纯方法，其特征在于，所述步骤S2中，洗脱所述第一吸附柱时采用的洗脱剂包括第一极性有机溶剂和缓冲盐的水溶液；优选地，所述第一极性有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈中的一种或多种，所述缓冲盐的水溶液为醋酸盐水溶液；更优选地，所述第一极性有机溶剂与所述缓冲盐的水溶液的体积比为1:(2～5)。5.根据权利要求4所述的提纯方法，其特征在于，所述第一极性有机溶剂为乙醇，所述缓冲盐的水溶液为醋酸钠水溶液；优选地，所述醋酸钠水溶液的浓度为0.1～1wt％，pH至为5.0～8.0；更优选地，所述醋酸钠水溶液的浓度为0.5wt％，pH值为7.5。6.根据权利要求5所述的提纯方法，其特征在于，所述步骤S2中，洗脱所述第一吸附柱的过程中采用多次洗脱，且每次洗脱过程中洗脱液中所述极性有机溶剂的浓度不同且逐渐升高；优选地，洗脱所述第一吸附柱的过程中，收集达托霉素纯度≥80.0％的洗脱液部分合并形成所述第一洗脱液。7.根据权利要求1至6中任一项所述的提纯方法，其特征在于，所述步骤S4中，所述反相硅胶填料为C8和/或C18，所述反相硅胶填料的粒径为10～50μm，孔径为60～300埃；优选地，所述反相硅胶填料为C18，所述反相硅胶填料的粒径为10μm，孔径为100埃。8.根据权利要求7所述的提纯方法，其特征在于，所述步骤S4中，所述第二浓缩液在所述制备柱中的上柱量为所述制备柱体积的0.5～2％，优选为1.5％；优选地，洗脱所述第二吸附柱的过程中收集达托霉素纯度≥98.5％的洗脱液部分合并形成所述第二洗脱液。9.根据权利要求7所述的提纯方法，其特征在于，所述步骤S4中，洗脱所述第二吸附柱时采用的洗脱剂为第二极性有机溶剂和水的混合液；优选地，所述第二极性有机溶剂为甲醇、