一种达托霉素的纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113563424A(43)申请公布日2021.10.29(21)申请号202111078697.0(22)申请日2021.09.15(71)申请人丽珠集团福州福兴医药有限公司地址350300福建省福州市福清市江阴工业集中区南港大道8号(72)发明人徐文灿刘文锋刘小刚邓婷王为民(74)专利代理机构福州市博深专利事务所(普通合伙)35214代理人董晗(51)Int.Cl.C07K7/08(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/20(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种达托霉素的纯化方法(57)摘要本发明属于抗生素生产技术领域，特别涉及一种达托霉素的纯化方法，包括含有杂质的达托霉素溶液在pH＝2.6～2.8的磷酸二氢钠缓冲体系中反应，并过聚合物反相层析柱的步骤。本发明所提供的达托霉素的纯化方法，可有效提高达托霉素产品粉的质量及收率。CN113563424ACN113563424A权利要求书1/1页1.一种达托霉素的纯化方法，其特征在于，包括含有杂质的达托霉素溶液在pH＝2.6～2.8的磷酸二氢钠缓冲体系中反应，并过聚合物反相层析柱的步骤。2.根据权利要求1所述达托霉素的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将达托霉素粗粉用去离子水溶解，并上层析柱进行脱盐，获得达托霉素脱盐液；S2、用10％氨水对所述达托霉素脱盐液调节pH＝6.0～6.5，并加入乙醇，获得上柱液；S3、用去离子水配制磷酸二氢钠‑磷酸氢二钠缓冲液，并用磷酸调节pH＝2.6～2.8；S4、在所述磷酸二氢钠‑磷酸氢二钠缓冲液中加入乙醇，获得预洗液和洗脱液；其中，所述洗脱液通过磷酸调节pH＝2.6～2.8；S5、将所述上柱液过聚合物反向层析柱，并用所述预洗液对聚合物反向层析柱进行预洗，再用所述洗脱液进行洗脱，以前杂质点D7＜0.3％，后杂质点D8＜0.3％进行收集，获得达托霉素收集液；S6、将所述达托霉素收集液进行赶醇和冻干，获得达托霉素成品粉。3.根据权利要求2所述达托霉素的纯化方法，其特征在于，所述达托霉素粗粉用去离子水溶解至达托霉素含量为2～3maU/mL。4.根据权利要求2所述达托霉素的纯化方法，其特征在于，在S1中，所述层析柱为HZ‑016。5.根据权利要求2所述达托霉素的纯化方法，其特征在于，在S1中，所述层析柱连接分光光度计，在245nm下检测吸光度值，以吸光度值＞30，开始收集，和在吸光度值＜30，停止收集为标准对达托霉素脱盐液进行收集。6.根据权利要求2所述达托霉素的纯化方法，其特征在于，所述磷酸二氢钠‑磷酸氢二钠缓冲液中磷酸二氢钠为3vol％。7.根据权利要求2所述达托霉素的纯化方法，其特征在于，所述预洗液含有20vol％乙醇。8.根据权利要求2所述达托霉素的纯化方法，其特征在于，所述洗脱液含有45vol％乙醇。9.根据权利要求2所述达托霉素的纯化方法，其特征在于，所述预洗液预洗聚合物反向层析柱3BV；所述洗脱液洗脱聚合物反向层析柱5BV。10.根据权利要求2所述达托霉素的纯化方法，其特征在于，所述赶醇为利用截留分子量为300的纳滤膜对达托霉素收集液进行水洗过滤，至纳滤膜出水端的电导率＜100为止。2CN113563424A说明书1/5页一种达托霉素的纯化方法技术领域[0001]本发明属于抗生素生产技术领域，特别涉及一种达托霉素的纯化方法。背景技术[0002]达托霉素作为一种环脂肽类抗生素，由链霉菌(S.reseosporus)发酵生产，其作为医药中间体，并可用于治疗由一些革兰氏阳性敏感菌株引起的并发型皮肤及皮肤结构感染。具体药理作用为可通过破坏细菌细胞膜、扰乱细胞膜转运氨基酸、改变细胞膜电位等方式实现抗菌、杀菌效果。[0003]在现有技术中，传统的醋酸盐缓冲体系在纯化达托霉素的层析过程中，无法去除产品峰前和产品峰后的杂峰，导致在收集液中，达托霉素含量较低，无法满足市场对于达托霉素成品的高质量要求。发明内容[0004]为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：解决传统达托霉素纯化方法收率低的问题。[0005]为了解决上述技术问题，本发明提供一种达托霉素的纯化方法，包括含有杂质的达托霉素溶液在pH＝2.6～2.8的磷酸二氢钠缓冲体系中反应，并过聚合物反相层析柱的步骤。[0006]本发明的有益效果在于：将含有杂质的达托霉素溶液在pH＝2.6～2.8的磷酸二氢钠的缓冲体系中反应，以通过缓冲体系中的成分与位于达托霉素产品峰前和产品峰后的杂质相结合，改变杂质极性和杂质在聚合物反相层析柱内的吸附速率，从而实现将杂质与达托霉素相分离，提高达托霉素产品粉的质量及收率。具体实施方式[0007]为详