分离纯化非达霉素的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109251229A(43)申请公布日2019.01.22(21)申请号201710572651.1(22)申请日2017.07.14(71)申请人成都大学地址610052四川省成都市龙潭都市工业集中发展区华冠路168号(72)发明人王欣荣翟龙飞褚以文傅慧垚张君利詹良静张新宜林家富刘超兰(74)专利代理机构成都立信专利事务所有限公司51100代理人冯忠亮(51)Int.Cl.C07H17/08(2006.01)C07H1/06(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称分离纯化非达霉素的方法(57)摘要本发明为分离纯化非达霉素的方法，解决已有分离纯化非达霉素的方法存在分离步骤多，生产成本高，回收率较低的问题。本发明所述的方法包括如下步骤：(1)含有非达霉素的粗品用有机溶剂溶解,加入碱溶液洗涤，有机相用干燥剂干燥后,减压浓缩得浓缩物；（2）步骤（1）得到的浓缩物过聚酰胺柱,梯度洗脱,收集含非达霉素的洗脱液,减压浓缩后结晶得到得白色粉末状非达霉素纯品，所得的非达霉素纯度在97%以上，总收率达到75%以上。本发明的方法能够得到高纯度的非达霉素,步骤少，工艺简单易行，收率高,环境友好,非常适合商业化生产。CN109251229ACN109251229A权利要求书1/1页1.一种分离纯化非达霉素的方法，其特征在于包括以下步骤：a.溶解：将含有非达霉素的粗品用有机溶剂充分溶解，过滤后得粗品溶液；b.洗涤:将适当体积的碱溶液加入步骤a得到的粗品溶液，二者体积比为1:9到7:3；两相充分混合，分层，有机相加入干燥剂干燥后，减压浓缩得浓缩物；c.层析:步骤b得到的浓缩物溶解后上样至聚酰胺柱,以有机溶剂水溶液和酸水的混合溶剂梯度洗脱,收集含有非达霉素的洗脱液；流速控制在0.2～2.5BV/h；d.浓缩及干燥:将分段收集到的含非达霉素洗脱液减压浓缩后结晶，真空干燥得到纯品。2.根据权利要求1所述的分离纯化非达霉素的方法，其特征在于：所述a步骤溶解过程中，含有非达霉素的粗品是指含有非达霉素的菌丝体，经溶剂浸提后的浓缩液或该浓缩液进一步经大孔树脂分离得到的含非达霉素粗品。3.根据权利要求1所述的分离纯化非达霉素的方法，其特征在于：所述a步骤溶解过程中有机溶剂为正丁醇、乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸丁酯、丙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷，1,2-二氯乙烷等可以与水溶液分层的溶剂中的一种或者它们中的混合物。4.根据权利要求1所述的分离纯化非达霉素的方法，其特征在于：所述b步骤洗涤过程中的碱溶液为无机碱或有机碱溶液，碱溶液重量百分浓度为0.1%到10%。5.根据权利要求4所述的分离纯化非达霉素的方法，其特征在于所述无机碱为氨水，氢氧化钠，氢氧化钾、碳酸铵、碳酸钠，碳酸氢钠，碳酸氢钾、碳酸氢氨等的一种或它们中的混合物。6.根据权利要求4所述的分离纯化非达霉素的方法，其特征在于所述有机碱为甲胺、乙胺、三乙胺等的一种或它们中的混合物。7.根据权利要求1所述的分离纯化非达霉素的方法，其特征在于所述c步骤层析过程中，所用填料为聚酰胺；有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈和丙酮等的一种或它们中的混合物，浓度为重量百分浓度20%到80%；酸水中的酸为有机酸或者无机酸，酸的重量百分浓度为0.01%到10%，有机溶剂水溶液与酸水的比例为体积比从3:7到9:1。8.根据权利要求7所述的分离纯化非达霉素的方法，其特征在于所述有机酸为甲酸、乙酸、三氟乙酸中的一种或它们中的混合物。9.根据权利要求7所述的分离纯化非达霉素的方法，其特征在于所述无机酸为磷酸、硼酸中的一种或它们的混合物。2CN109251229A说明书1/4页分离纯化非达霉素的方法技术领域[0001]本发明涉及药物化学领域的应用，具体涉及一种高效分离纯化非达霉素的方法。背景技术[0002]非达霉素（Fidaxomicin）是由多种微生物发酵产生的次级代谢产物，又名台勾霉素B（TiacumicinB）,其分子式为C52H74Cl2O18,其主要通过抑制细菌的RNA聚合酶二迅速产生抗难治梭状芽孢杆菌感染（CDI）的作用，优于万古霉素等现有药物，具有更低的复发率。[0003]中国发明专利CN104846043A公开了制备非达霉素的方法，该发明提供了一种从发酵液中分离和纯化非达霉素的工艺,包括：放线菌桔橙指孢囊菌Dactylosporangiumaurantiacumhamdenensis亚种NRRL18085菌株发酵结束后,极性有机溶剂浸提菌丝体；浸提液浓缩后过大孔吸附树脂柱,收集含有非达霉素的解析液；解析液浓缩后用有机溶剂萃取；萃取液浓缩后经正向柱层析,得到非达霉素粗品；该粗品经高压制备液相色谱设备,用含水的极性溶剂作为流动相、并添加酸或酸性盐调节pH,