用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒及提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113088516A(43)申请公布日2021.07.09(21)申请号202110523665.0(22)申请日2021.05.13(71)申请人张帮周地址361001福建省厦门市思明区湖滨南路201号(72)发明人张帮周何剑全罗旌万肖传兴林爱强杨璐溪(74)专利代理机构南昌金轩知识产权代理有限公司36129代理人殷康明(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图2页(54)发明名称用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒及提取方法(57)摘要本发明公开了一种用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒及提取方法，属于分子生物学核酸提取领域，用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒包括除杂液A、裂解液B、漂洗液C、漂洗液D以及洗脱液E，除杂液A、裂解液B、漂洗液C、漂洗液D以及洗脱液E依次加入试管中与粪便微生物相反应，以提取DNA。与此相应，一种用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒的提取方法，按除杂步骤、裂解步骤、漂洗步骤以及洗脱步骤依次执行。本发明公开的用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒及提取方法，不仅能够有效地去除粪便中的腐殖酸、多糖、多酚、色素等PCR抑制剂，而且能够方便、经济、快捷地得到纯度高、回收率高、完整性好的DNA。CN113088516ACN113088516A权利要求书1/2页1.一种用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒，包括除杂液A、裂解液B、漂洗液C、漂洗液D以及洗脱液E，所述除杂液A、所述裂解液B、所述漂洗液C、所述漂洗液D以及所述洗脱液E依次加入试管中与粪便微生物相反应，以提取DNA，其特征在于：所述除杂液A包括以下物质：CTAB、EDTA、PVP30、NaCl、TritonX‑100、Tween‑20、柠檬酸以及柠檬酸钠；所述裂解液B包括以下物质：盐酸胍、CTAB、PVP30、柠檬酸以及柠檬酸钠。2.根据权利要求1所述的用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒，其特征在于：在所述除杂液A中，CTAB的质量比范围配置为1～3％m/m，EDTA的体积摩尔浓度范围配置为20～30mM，PVP30的质量比范围配置为1～3％m/m，NaCl的体积摩尔浓度范围配置为1.5～2.0M，TritonX‑100的体积比范围配置为1～3％v/v，Tween‑20的体积比范围配置为0.5～1％v/v，柠檬酸的体积摩尔浓度范围配置为0.1～0.5M，柠檬酸钠的体积摩尔浓度范围配置为0.2～1M，所述除杂液A的pH范围配置为4.0～4.5。3.根据权利要求1所述的用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒，其特征在于：在所述裂解液B中，盐酸胍的体积摩尔浓度范围配置为4～6M，CTAB的质量比范围配置为0.5～1.5％m/m，PVP30的质量比范围配置为0.5～1.5％m/m，柠檬酸的体积摩尔浓度范围配置为0.1～0.5M，柠檬酸钠的体积摩尔浓度范围配置为0.2～1M，所述裂解液B的pH范围配置为4.0～4.5。4.根据权利要求1所述的用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒，其特征在于：所述漂洗液C包括以下物质：盐酸胍、NaCl以及无水乙醇。5.根据权利要求1所述的用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒，其特征在于：所述漂洗液D包括以下物质：Tris以及无水乙醇。6.根据权利要求1所述的用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒，其特征在于：所述洗脱液E包括以下物质：Tris以及EDTA。7.根据权利要求4所述的用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒，其特征在于：在所述漂洗液C中，盐酸胍的体积摩尔浓度范围配置为2～4M，NaCl的体积摩尔浓度配置为0.15M，无水乙醇的体积比配置为56％v/v。8.根据权利要求5所述的用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒，其特征在于：在所述漂洗液D中，Tris的体积摩尔浓度配置为25mM，无水乙醇的体积比配置为70％v/v，所述漂洗液D的pH范围配置为7～7.5。9.根据权利要求6所述的用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒，其特征在于：在所述洗脱液E中，Tris的体积摩尔浓度配置为10mM，EDTA的体积摩尔浓度配置为0.5mM，所述洗脱液E的pH配置为8.0。10.一种用于权利要求1至9任一项所述用于粪便微生物基因组的DNA提取试剂盒的提取方法，按除杂步骤、裂解步骤、漂洗步骤以及洗脱步骤依次执行，其特征在于：所述除杂步骤具体包括以下步骤：1)称取新鲜粪便置于灭菌离心管中；2)添加所述除杂液A到上述离心管中，在涡旋振荡器中匀质化5min；3)将匀质化后的样品置于70℃的金属浴中孵育5min，期间每隔2min分钟上下颠倒混匀1次：2CN113088516A权利要求书2/2页4)孵育结