一种用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113186250A(43)申请公布日2021.07.30(21)申请号202110523659.5(22)申请日2021.05.13(71)申请人厦门承葛医学检验实验室有限公司地址361101福建省厦门市翔安区莲亭路831号B17#302(72)发明人罗旌万张帮周肖传兴林爱强何剑全汪涵(74)专利代理机构南昌金轩知识产权代理有限公司36129代理人殷康明(51)Int.Cl.C12Q1/6806(2018.01)C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图2页(54)发明名称一种用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂(57)摘要本发明公开了一种用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂，属于分子生物学核酸提取领域，用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂包括以下物质：CTAB、EDTA、PVP30、NaCl、TritonX‑100、柠檬酸以及柠檬酸钠。本发明公开的用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂，使用该除杂试剂能够有效地去除粪便中的腐殖酸、多糖、多酚、色素等PCR抑制剂，配合QIAGEN公司的裂解液BufferAL、漂洗液BufferAW1和BufferAW2能够得到纯度高、回收率高、完整性好的gDNA。CN113186250ACN113186250A权利要求书1/1页1.一种用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂，其特征在于：包括以下物质：CTAB、EDTA、PVP30、NaCl、TritonX‑100、柠檬酸以及柠檬酸钠。2.根据权利要求1所述的用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂，其特征在于：所述CTAB的质量比范围配置为1～3％m/m。3.根据权利要求1所述的用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂，其特征在于：所述EDTA的体积摩尔浓度范围配置为20～30mM。4.根据权利要求1所述的用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂，其特征在于：所述PVP30的质量比范围配置为1～3％m/m。5.根据权利要求1所述的用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂，其特征在于：所述NaCl的体积摩尔浓度范围配置为1.5～2.0M。6.根据权利要求1所述的用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂，其特征在于：所述TritonX‑100的体积比范围配置为1～3％v/v。7.根据权利要求1所述的用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂，其特征在于：所述柠檬酸的体积摩尔浓度范围配置为0.1～0.5M。8.根据权利要求1所述的用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂，其特征在于：所述柠檬酸钠的体积摩尔浓度范围配置为0.2～1M。9.根据权利要求1所述的用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂，其特征在于：所述用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂的pH范围配置为4.0～4.5。2CN113186250A说明书1/6页一种用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂技术领域[0001]本发明涉及分子生物学核酸提取领域，尤其涉及一种用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂。背景技术[0002]近年来关于肠道菌群的研究不断涌现，肠道菌群在人类健康中的作用也越来越得到人们关注。肠道菌群是人体肠道的正常微生物，种类繁多，数目众多。据估算，一个正常成人体内，肠道细菌总重量可达1～1.5kg。它们能够影响体重和消化能力，抵御感染和自身免疫疾病的患病风险，除此之外，还与一些内分泌代谢性疾病、肾脏疾病、神经性疾病、心血管疾病、呼吸系统疾病以及癌症的发生具有密切关联。[0003]肠道内拥有数量众多、种类丰富的肠道菌群，它们和宿主间形成了互利共生的关系，是人类的第二套基因组，与宿主健康有着直接或间接的影响。因此研究宿主肠道菌群尤为重要，通过查看宿主肠道菌群状态可以判断宿主健康情况或与疾病的关系，并可据此提供改善或治疗的方案。而研究肠道菌群就涉及到肠道菌群核酸的提取，所以获取高质量的肠道菌群gDNA尤为重要，它将影响后续PCR及高通量测序。但是，目前传统的去除抑制剂的方法操作复杂，而市售的粪便微生物基因组除杂试剂价格高，所以提供一种操作简单易行、成本低的除杂试剂越来越重要。发明内容[0004]为了克服现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题在于提出一种用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂，可有效地去除粪便中的腐殖酸、多糖、多酚、色素等PCR抑制剂，使医护工作者通过本申请的除杂试剂可以便捷高效地提取粪便微生物基因组DNA，有助于医护工作者对肠道菌群进行研究，为后续PCR或高通量建库提供质量保证。[0005]为达此目的，本发明采用以下技术方案：[0006]本发明提供的一种用于粪便微生物基因组DNA提取的除杂试剂，包括以下物质：CTAB、EDTA、PVP30