粪便基因组DNA提取试剂盒说明书.doc

磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案

磁珠法粪便基因组DNA提取试剂盒（常规版）

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磁珠法粪便基因组DNA提取试剂盒（常规版）
MagBeadsFaecesDNAExtractionKit(RegularVersion)

【目录号】FDE-5005、FDE-5030
【运输条件】2~25℃；
【保存条件】磁珠悬浮液、裂解液22~8℃，蛋白酶K-20℃，其它组分室温；
【试剂盒组成】
KitComponent
试剂盒组成FDE-5005
（50T）FDE-5030
（300T）FDEMagneticBeads
磁珠悬浮液5mL25mLFDEBuffer1
裂解液150mL300mLFDEBuffer2
裂解液212.5mL75mLProteinaseKsolution
蛋白酶K溶液1mL6mLWashBuffer
清洗液30mL180mLEluteBuffer
洗脱液5mL30mL【注意事项】
磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；
使用前请检查裂解液1/2中是否出现结晶，如有结晶请将置于于37℃环境中重新溶解；
蛋白酶K长期不使用，请置于-20℃保存，融化后4℃保存，并尽快使用；
本操作指南经本公司反复验证，使用前请仔细阅读，并且按照操作指南建议操作。
【产品简介】
本试剂盒适用于从各种固态或液态粪便样本中分离纯化基因组DNA。试剂盒采用具有独特分离作用的纳米磁珠和缓冲液体系，特殊技术包埋的磁珠在特定条件下对核酸具有极强的富集能力，当条件改变时，磁珠会释放所吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。方法简便、快捷、质量稳定。提取所得基因组DNA产物，纯度优良，可应用于酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Sputhem杂交、芯片检测和高通量测序等各种下游分子生物学实验。本试剂盒可手动法在EP管中进行操作，亦可配合核酸提取仪实现自动化操作。
【试剂盒说明】
样本类型样本量DNA提取范围固态粪便200mg5~40μg液态粪便200μL1~20μg【自备试剂】
异丙醇、80%乙醇、RNaseA溶液(100mg/mL，分散液10mMTris-HCl,1mMEDTA,pH值8.0)。
【自备仪器&耗材】
仪器自动版：涡旋混合仪、高速离心机、金属浴或水浴锅、96孔方孔圆底板、英芮诚ETP-300核酸提取仪、磁棒套。
手动版：涡旋混合仪、高速离心机、EP管、EP管用磁力架。
【仪器自动版操作步骤】
以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成32个样本的提取工作。
96孔板加液
样本位1、72、83、94、105、116、12试剂磁珠悬浮液
75μL异丙醇400μL清洗液
600μL80%乙醇
600μL80%乙醇
600μL洗脱液100μL参照下表用量向96孔板中分别加入相应试剂。
注：1）每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀；2）为提高效率建议使用排枪进行加液操作。
样本裂解
取约200mg固态粪便样本或约200μL液态粪便样本，置于EP管中，依次加入1mL裂解液1和20μL蛋白酶K，涡旋振荡1min（须将管底粪便充分振荡起来），然后置于58℃环境中裂解30min，每隔5min颠倒混匀一次；
注：如需去除RNA，请额外加入5μLRNaseA溶液。
裂解完毕，室温、12,000rpm离心5min，转移400μL上清液至新的EP管内；
向新的EP管中加入250μL裂解液2，上下颠倒5次混合均匀，室温、12,000rpm离心5min后待用。
上机提取
从步骤2裂解完毕样本中吸取450μL上清液至加液完毕的96孔板第2/8列孔位中，将96孔板置于ETP-300型核酸提取仪中，并插入磁棒套，运行仪器操作软件，调用“粪便核酸提取”程序并执行。
“粪便核酸提取”程序参数设置如下，如仪器程序参数与说明书不一致，请以说明书为准：步骤编号孔位运行类型振荡时间(秒)分离时间(秒)挥发时间(秒)振荡幅度振荡强度一组温度(℃)二组温度(℃)三组温度(℃)四组温度(℃)11磁珠转移11002弱000022DNA结合120004强000032DNA结合4001504弱000043清洗12501005强000054清洗22801005强000065清洗2240103005强000076洗脱5002002强6060606083弃磁珠15005强0000核酸转移
程序运行完毕，取下96孔板，将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中，提取过程完毕，此时可弃去96孔板。
【手动版操作步骤】
样本裂解
参照【仪器自动版操作步骤】中步骤2进行操作。
核酸结合
向裂解完