提取基因组DNA的试剂盒和提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN104630208A(43)申请公布日2015.05.20(21)申请号201510072951.4(22)申请日2015.02.11(71)申请人杭州百迈生物技术有限公司地址310007浙江省杭州市西湖区西园路8号3幢501室-1(72)发明人林源吉丁佳女叶俊波洪巧娟(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书13页附图7页(54)发明名称提取基因组DNA的试剂盒和提取方法(57)摘要本发明提供了提取基因组DNA的试剂盒和方法，所述试剂盒包括试剂1、试剂2和试剂3。所述试剂1包括十六烷基三甲基溴化铵、Tris、EDTA、PVP、NaCl；试剂2包括盐酸胍、乙醇、柠檬酸钠；试剂3包括盐酸胍、甘氨酸。本发明所述试剂盒增强了所提取基因组DNA的纯度和完整性，提高产物得率。所用试剂无毒无害，保证操作人员的健康，减少环境的污染。本发明所述方法可提取微量样本中的基因组DNA，实现了被检测的物体的无损伤取样，且提取方法简单，提取时间短，提高了提取效率。CN104630208ACN104630208A权利要求书1/1页1.提取基因组DNA的试剂盒，包括试剂1、试剂2和试剂3，其中所述试剂1包括以下组分：0.1％-5％的十六烷基三甲基溴化铵(质量百分比)、10mM-200mM的Tris、10mM-200mM的EDTA、0.1％-10％的PVP(质量百分比)、0.1M-5M的NaCl、溶剂为去离子水；试剂2包括以下组分：0.1M-6.5M的盐酸胍、1％-50％的乙醇(体积百分比)、0.1M-2M的柠檬酸钠、溶剂为去离子水；试剂3包括以下组分：0.1M-8M的盐酸胍、0.05M-0.2M的甘氨酸、溶剂为去离子水。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括洗涤液。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括洗脱液。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的洗涤液包括去蛋白洗涤液和去离子洗涤液。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述去蛋白洗涤液包括1M-6M的盐酸胍，1mM-50mM的EDTA·2Na·2H2O，溶剂为去离子水；所述去盐洗涤液包括20mM-200mM的NaAC·3H2O，溶剂为去离子水；洗脱液为去离子水。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂1包括以下组分：3.5％的十六烷基三甲基溴化铵、120mM的Tris、110mM的EDTA、6％的PVP、3M的NaCl、溶剂为去离子水；试剂2包括以下组分：2.5M的盐酸胍、25％的乙醇、1M的柠檬酸钠、溶剂为去离子水；试剂3包括以下组分：4M的盐酸胍、0.1M的甘氨酸、溶剂为去离子水。7.提取基因组DNA的方法，包括以下步骤：(1)采样；(2)裂解样品细胞：加入65℃预热的试剂1和ProteinaseK，涡旋振荡，混合均匀，65℃水浴0.5h-过夜；(3)沉淀非DNA的杂质：将步骤2中的混合物冷却至室温，加入试剂2，混合均匀，冰浴；(4)离心步骤3所得混合物，取上清，加入CarrierRNA和试剂3，混合均匀后加入异丙醇，混匀；(5)将步骤4所得混合物中的DNA与纯化载体结合，经过洗涤液的去蛋白洗涤和去盐洗涤，以及洗脱液的洗脱步骤，获得可用于检测的样本基因组DNA；其中，所述的试剂1包括以下组分：0.1％-5％的十六烷基三甲基溴化铵(质量百分比)、10mM-200mM的Tris、10mM-200mMEDTA、0.1％-10％的PVP(质量百分比)、0.1M-5M的NaCl、溶剂为去离子水；试剂2包括以下组分：0.1M-6.5M的盐酸胍、1％-50％的乙醇(体积百分比)、0.1M-2M的柠檬酸钠、溶剂为去离子水；试剂3包括以下组分：0.1M-8M的盐酸胍、0.05M-0.2M的甘氨酸、溶剂为去离子水。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，其中步骤4所述的纯化载体选自核酸提取纯化柱或磁珠。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤2中65℃水浴时间为0.5h-2h。10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在步骤3冰浴时间为10min。2CN104630208A说明书1/13页提取基因组DNA的试剂盒和提取方法技术领域[0001]本发明涉及分子生物学的生物样品提取领域，尤其涉及一种提取基因组DNA的试剂盒和提取方法。背景技术[0002]目前常采用CTAB法、PTB法、QIAGEN试剂盒法、高盐低pH法等方法提取基因组DNA。CTAB法采用CTAB(hexadecyltrimethylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化铵)，它是一种阳离子去污剂，在高离子强度的溶液中，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，产生沉淀，