粪便DNA快速提取试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106967712A(43)申请公布日2017.07.21(21)申请号201710332851.X(22)申请日2017.05.12(71)申请人广州和实生物技术有限公司地址510535广东省广州市高新技术产业开发区科学城开源大道11号A8栋第四层B单元(72)发明人刘淑园陈华云丁渭肖湘文张天海陆同山邓利琼(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称粪便DNA快速提取试剂盒(57)摘要本发明公开了粪便DNA快速提取试剂盒，该提取试剂原理为：对所提取的粪便用粪便处理液进行前处理，离心除去粪便残渣和吸附去掉部分蛋白等杂质，用磁珠裂解液和蛋白酶K将核酸裂解释放出来，释放出来的核酸特异性的结合到混合了特异性探针的磁珠上，通过1轮洗涤液1和2轮洗涤液2的洗涤后，用洗脱液将核酸从磁珠上洗脱下来并把洗脱后的磁珠弃掉，最后得到粪便基因组。CN106967712ACN106967712A权利要求书1/1页1.粪便DNA快速提取试剂盒，包括：粪便处理液、探针磁珠、蛋白酶K、裂解结合液、洗涤液1、洗涤液2、洗脱液、96孔板、封板膜、磁棒套。2.根据权利要求1所述的粪便DNA快速提取试剂盒，其特征在于：粪便处理液是由1~3M异硫氰酸胍、5%~15%chelex-100、1~3MBSU、0.05~0.2MIDU、0.3~0.8Mglycine、0.1~0.3Mbestain组成。3.根据权利要求1所述的粪便DNA快速提取试剂盒，其特征在于：磁珠的磁性强，1-3秒即可彻底吸附，易分散，轻轻振荡即可实现单分散；表面结合了特异性探针，可特异性的和人基因组结合。4.根据权利要求1所述的粪便DNA快速提取试剂盒，其特征在于：蛋白酶K，为1~3mg/ml，不能直接和裂解结合液接触。5.根据权利要求1所述的粪便DNA快速提取试剂盒，其特征在于：裂解结合液，是由1~3M胍盐、4~7M三羟基氨基甲烷盐酸盐、2.5~4M十四烷基硫酸钠混合而成。6.根据权利要求1所述的粪便DNA快速提取试剂盒，其特征在于：洗涤液1：为1~3M的胍盐溶液，并含有体积浓度为35%~50%的醇溶液。7.根据权利要求1所述的粪便DNA快速提取试剂盒，其特征在于：洗涤液2：为0.5~2M三羟基氨基甲烷盐酸盐，并含有体积浓度为35%~50%的醇溶液。8.根据权利要求1所述的粪便DNA快速提取试剂盒，其特征在于：洗脱液：1~3M的盐酸盐溶液，PH：7~9。9.根据权利要求1所述的粪便DNA快速提取试剂盒，其特征在于：探针磁珠、裂解结合液、洗涤液1、洗涤液2、洗脱液、96孔板、封板膜组成了一个预分装板。10.根据权利要求9所述的粪便DNA快速提取试剂盒，其特征在于：预分装板的排列如下：第一列（第七列）是裂解结合液，第二列（第八列）是磁珠，第三列（第九列）是洗涤液1，第四列（第十列）是洗涤液2，第五列（第十一列）是洗涤液2，第六列（第十二列）是洗脱液，配合磁棒套可配套自动提取仪进行提取。2CN106967712A说明书1/4页粪便DNA快速提取试剂盒技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，涉及一种粪便DNA快速提取试剂盒。背景技术[0002]结直肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤，早期症状不明显，随着癌肿的增大而表现排便习惯改变、便血、腹泻、腹泻与便秘交替、局部腹痛等症状，晚期则表现贫血、体重减轻等全身症状。源发在结肠部位的癌细胞称为结肠癌，源发在直肠的称为直肠癌；两器官都受影响则称为结肠直肠癌。它是目前全球普遍可见的消化系统癌症，发病率近年来不断上升，其发病率和病死率在消化系统恶性肿瘤中仅次于胃癌、食管癌和原发性肝癌。结直肠癌也是目前最可预防的肿瘤之一。它通常起源于结肠或直肠上皮的非癌性新生物“息肉”。如果通过筛查，早期发现并摘除，就能阻止它变成肿瘤。医学界认为，如果及早发现，肠癌是最易治愈的癌症。[0003]目前，常用的结直肠癌早期诊断的方法有结肠镜检测、大便隐血检测、粪便RNA检测、粪便DNA检测。结肠镜检测法具有侵入性、肠道穿孔风险高的缺陷。大便隐血检测是非入侵性的，但是检测前需要控制饮食，而且检测灵敏度低、特异性差易出现误差。粪便DNA检测是无创的检测技术，但粪便DNA提取困难，操作繁琐，检测成功率低。所以迫切需要一种能够快速提取粪便DNA的试剂盒。[0004]通过粪便DNA检测进行结直肠癌早期诊断，就要对粪便中的人基因组DNA进行高效提取。但是还有许多难题需要解决，比如，在样本的采集和分离过程中往往会因为DNA酶的降解作用，各种酶阻抑剂（粘液、细菌和食物残渣等等）和胆盐的存在导致从粪便里提取出来的人体DNA产量非常少或者提取出的DNA杂质多而难以用于PCR扩增。为了