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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113087723A(43)申请公布日2021.07.09(21)申请号202010020181.X(22)申请日2020.01.09(71)申请人鲁南制药集团股份有限公司地址276006山东省临沂市红旗路209号(72)发明人张贵民马印虎朱兵峰(51)Int.Cl.C07D498/18(2006.01)权利要求书2页说明书14页(54)发明名称一种西罗莫司的分离纯化方法(57)摘要本发明属于医药技术领域,具体涉及一种西罗莫司的分离纯化方法,通过微生物发酵培养出含西罗莫司的发酵液,提取采用菌丝体收集、浸提、萃取、活性炭纤维脱色、粗结晶、树脂柱层析和结晶得到西罗莫司。本发明提供的西罗莫司的分离纯化方法工艺路线短、生产成本低、更加环保,获得的产品纯度可达99.9%以上、收率提高至78%,适合于工业规模上生产高纯度西罗莫司。CN113087723ACN113087723A权利要求书1/2页1.一种西罗莫司的分离纯化方法,其特征在于,它包括如下内容:通过微生物发酵培养出含西罗莫司的发酵液,提取分离纯化采用菌丝体收集、浸提、萃取、活性炭纤维脱色、粗结晶、树脂柱层析和结晶得到西罗莫司。2.根据权利要求1所述西罗莫司的分离纯化方法,其特征在于,它包括如下步骤:A.浸提:收集西罗莫司发酵液,过滤得菌丝体,将菌丝体浸入有机溶剂中,浸提后过滤,得到菌丝体浸提液;B.萃取:将西罗莫司浸提液进行真空减压浓缩,向浓缩液中加入十二烷基苯磺酸钠,使用乙酸乙酯进行一次萃取,收集萃取相;C.活性炭纤维脱色:将萃取液通过含有活性炭纤维的过滤器,收集脱色滤液;D.粗结晶:将步骤C所得的滤液减压浓缩,收集浓缩液,向浓缩液中添加析晶溶剂,析晶、抽滤,即可得到西罗莫司粗品;E.树脂柱层析:使用流动相溶解西罗莫司粗品,加入树脂柱中,树脂柱填料为层析型树脂填料,洗脱前向洗脱溶剂中加入缓冲盐添加剂,出料后分段收集,同时使用HPLC在线检测,收集含西罗莫司的流出液;F.萃取:将步骤E所述流出液进行真空减压浓缩,使用乙酸乙酯进行萃取,收集萃取相;向萃取相中加入无水硫酸钠吸附水分,过滤,收集滤液;G.结晶:将步骤F收集的滤液真空浓缩,然后降温析晶,抽滤,使用乙醚、甲基叔丁基醚或环丙醚进行漂洗,抽滤,真空干燥,即得西罗莫司成品,取样进行HPLC检测。3.根据权利要求2所述西罗莫司的分离纯化方法,其特征在于,步骤C中所述的活性炭纤维的型号选自bjrxyw-01、bjrxyw-02、bjrxyw-03或bjrxyw-04中的一种,脱色温度20~45℃,pH=6.5~7.5。4.根据权利要求2所述西罗莫司的分离纯化方法,其特征在于,步骤D中所述的析晶溶剂选自甲基叔丁基醚、乙醚、环丙醚或环己烷中一种,加入体积为浓缩液体积的1~3倍。5.根据权利要求2所述西罗莫司的分离纯化方法,其特征在于,步骤E中所述的树脂柱填料选自聚苯乙烯型、聚丙烯酸型或聚苯乙烯/二乙烯基苯层析型树脂中的一种。6.根据权利要求2或5所述西罗莫司的分离纯化方法,其特征在于,步骤E中所述树脂柱填料选自HP20SS、色谱一号至五号、Unips40-300和PS40-300中的一种。7.根据权利要求2所述西罗莫司的分离纯化方法,其特征在于,步骤E中所述的洗脱溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮或异丙醇的水溶液,洗脱溶剂中有机溶剂的体积浓度为30~80%。8.根据权利要求2所述西罗莫司的分离纯化方法,其特征在于,步骤E中所述的缓冲盐添加剂为pH6.0~6.5的缓冲盐,选自磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸2CN113087723A权利要求书2/2页缓冲液、乙酸-乙酸铵缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液或三氟乙酸缓冲液中的一种,缓冲盐添加剂的加入体积为洗脱溶剂体积的0.5~1.5%。9.根据权利要求2所述西罗莫司的分离纯化方法,其特征在于,步骤E中所述的树脂层析柱的上样量为8~20g/L。10.根据权利要求2所述西罗莫司的分离纯化方法,其特征在于,步骤G中所述的真空浓缩的温度为30~50℃,并按5~10℃/h梯度降温析晶。3CN113087723A说明书1/14页一种西罗莫司的分离纯化方法技术领域[0001]本发明属于生物制药领域,具体涉及一种大环内酯抗生素类免疫抑制剂的分离纯化方法。背景技术[0002]西罗莫司(sirolimus)又称雷帕霉素(rapamycin),是一种31元大环内酯类免疫抑制剂,由吸水链霉菌(StreptomyceshygroscopicusACCCNo.40417)、游动放线菌N902-109(Actinoplanessp.N902-109)与伊氏链霉菌(Streptomycesiranensis)等放线菌菌株产生,具有广泛的生物活性