一种他克莫司的分离纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113912624A(43)申请公布日2022.01.11(21)申请号202111471075.4(22)申请日2021.12.03(71)申请人北大方正集团有限公司地址100871北京市海淀区成府路298号中关村方正大厦9层申请人北大医药重庆大新药业股份有限公司北大医疗产业集团有限公司(72)发明人赵燕何勇崴张葵(74)专利代理机构北京同立钧成知识产权代理有限公司11205代理人刘丹臧建明(51)Int.Cl.C07D498/18(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图1页(54)发明名称一种他克莫司的分离纯化方法(57)摘要本发明提供一种他克莫司的分离纯化方法，包括：1)将他克莫司发酵液使用陶瓷膜过滤，得到发酵液浓液；2)向所述发酵液浓液中加入乙醇得到混合体系，随后向所述混合体系中加入树脂进行吸附；3)使用乙醇溶液对吸附后的树脂进行洗脱，得到他克莫司层析粗品；4)对所述他克莫司层析粗品依次进行一次结晶，制备柱分离，二次结晶，得到他克莫司纯品。该分离纯化方法操作简单，成本低，能够高纯度高收率的得到他克莫司。CN113912624ACN113912624A权利要求书1/1页1.一种他克莫司的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将他克莫司发酵液使用陶瓷膜过滤，得到发酵液浓液；2)向所述发酵液浓液中加入乙醇得到混合体系，随后向所述混合体系中加入树脂进行吸附；3)使用乙醇溶液对吸附后的树脂进行洗脱，得到他克莫司层析粗品；4)对所述他克莫司层析粗品依次进行一次结晶，制备柱分离，二次结晶，得到他克莫司纯品。2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述混合体系中乙醇的体积浓度为30～35％。3.根据权利要求1或2所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤3)中，所述使用乙醇溶液对吸附后的树脂进行洗脱，包括：1)将所述吸附后的树脂装柱，得到第一树脂柱，并使所述第一树脂柱依次串联第二树脂柱与第三树脂柱；所述第二树脂柱与所述第一树脂柱中的树脂相同且均为极性大孔树脂；所述第三树脂柱中的树脂为非极性大孔树脂；2)采用第一乙醇溶液对吸附后的树脂进行洗脱，待他克莫司从所述第二树脂柱中解吸后，采用第二乙醇溶液单独对第三树脂柱进行洗脱，得到所述他克莫司层析粗品；所述第一乙醇溶液的体积浓度小于所述第二乙醇溶液的体积浓度。4.根据权利要求3所述的分离纯化方法，其特征在于，所述极性大孔树脂选自华震HZ806、华震HZ826、华震HP2MG中的至少一种。5.根据权利要求3或4所述的分离纯化方法，其特征在于，所述第一乙醇溶液的体积浓度为40～60％；和/或，所述第二乙醇溶液的体积浓度为65～80％。6.根据权利要求3‑5任一项所述的分离纯化方法，其特征在于，所述第一树脂柱中的树脂与所述第二树脂柱中的树脂以及所述第三树脂柱中的树脂的体积比为1:(2～3):(5～8)。7.根据权利要求3‑6任一项所述的分离纯化方法，其特征在于，所述非极性大孔树脂选自三菱HP20、华震色谱3号、华震HZ818、华震HZ816、华震HZ820的至少一种。8.根据权利要求1‑7任一项所述的分离纯化方法，其特征在于，所述一次结晶包括：在50℃下，将所述他克莫司层析粗品在甲苯中溶解至质量浓度为10～20mg/L，再降至室温析晶12～15h，得到一次结晶粗品。9.根据权利要求1‑8任一项所述的分离纯化方法，其特征在于，所述制备柱分离包括：将经过所述一次结晶后得到的粗品溶解，利用聚酰胺树脂作为制备柱填料进行所述制备柱分离，收集他克莫司馏分；所述制备柱分离的色谱条件为：波长：214nm；色谱柱尺寸：50mm×250mm；流动相：乙酸丁酯或甲苯与丙酮的混合溶剂，载样量：20g/L。10.根据权利要求9所述的分离纯化方法，其特征在于，所述二次结晶包括：将他克莫司馏分浓缩至他克莫司的浓度为180～220mg/mL，在30℃下静置析晶，过滤后得到所述他克莫司纯品。2CN113912624A说明书1/8页一种他克莫司的分离纯化方法技术领域[0001]本发明属于生物制药领域，涉及一种他克莫司的分离纯化方法。背景技术[0002]他克莫司又名FK506，是从链霉菌属中分离出的发酵产物，是一种大环内酯类抗生素，同时也是一种强力的新型免疫抑制剂，其主要通过抑制白介素‑2(IL‑2)的释放，从而全面抑制T淋巴细胞，其免疫抑制活性是传统免疫剂环孢素A的10‑100倍。虽然已有文献报道了他克莫司的全合成方法，但其步骤繁琐、成本高、难度大，难以应用到工业化生产中。[0003]目前，他克莫司主要是通过从发酵液中分离提取得到，但大多数能够产生他克莫司的菌株在发酵过程中还会产生子囊霉素和一些其他大环内酯杂质，这些杂质与他克莫司