一种连续法从罗汉果根中分离多种罗汉果酸单体的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113121633A(43)申请公布日2021.07.16(21)申请号202110488606.4(22)申请日2021.05.06(71)申请人湖南华诚生物资源股份有限公司地址410205湖南省长沙市高新开发区东方红街道杏康南路8号(72)发明人贺进军李伟黄华学黄俊宋谷良江小龙(74)专利代理机构北京中知星原知识产权代理事务所(普通合伙)11868代理人艾变开王维佳(51)Int.Cl.C07J71/00(2006.01)C07J9/00(2006.01)C12P33/20(2006.01)C12P33/06(2006.01)权利要求书2页说明书7页(54)发明名称一种连续法从罗汉果根中分离多种罗汉果酸单体的方法(57)摘要本发明涉及一种连续法从罗汉果根中分离多种罗汉果酸单体的方法，包括以下步骤：罗汉果根在弱酸性的条件下酶解后，在碱性条件下用醇水溶液渗漉提取，过滤，脱色，浓缩，所得浓缩液在酸性条件下进行萃取得到罗汉果总酸，罗汉果总酸通过色谱进行梯度洗脱分离，按照极性流出顺序依次是罗汉果酸乙、罗汉果酸甲、罗汉果酸丁和罗汉果酸丙。本发明采用碱性条件下酶解后进行渗漉提取，同时使罗汉果酸苷水解，使其成为游离的罗汉果酸、成盐并浸出，提高罗汉果酸的得率。本发明工艺连贯、简单，可操作性强，生产成本低，不使用有毒有害化工溶剂，安全环保，且产品含量高、收率高，适合工业化生产的从罗汉果根中提取、分离罗汉果总酸的方法。CN113121633ACN113121633A权利要求书1/2页1.一种连续法从罗汉果根中分离多种罗汉果酸单体的方法，包括以下步骤：罗汉果根在弱酸性的条件下酶解后，在碱性条件下用醇水溶液渗漉提取，过滤，脱色，浓缩，所得浓缩液在酸性条件下进行萃取得到罗汉果总酸，罗汉果总酸通过色谱进行梯度洗脱分离，按照极性流出顺序依次是罗汉果酸乙、罗汉果酸甲、罗汉果酸丁和罗汉果酸丙。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述弱酸性条件是pH为5‑6，酸性条件是pH为2‑5，碱性条件是pH是13.0‑13.7。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，酶解是还加入罗汉果根的0.2‑0.5wt％的硼酸盐；优选地，所述硼酸盐选自硼酸钠、硼酸钾中的至少一种。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶解是粉碎的罗汉果根投入到pH5‑6的酶溶液中，所述酶为β‑葡萄糖苷酶，酶的用量是罗汉果根的0.5‑2wt％。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述渗漉提取的醇水溶液中，醇的体积浓度为60‑95％；所述醇水溶液的体积用量是罗汉果根质量的8‑10倍，单位为L/kg。渗漉提取的流速为0.5‑2.0BV/小时，优选0.8‑1.5BV/小时。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述过滤为陶瓷膜过滤，陶瓷膜的孔径为10‑100nm，所述陶瓷膜过滤的压力为0.2‑0.5Mpa；所述脱色是用氧化铝或氧化镁层析柱，所述氧化铝或氧化镁的用量为罗汉果根原料重量的0.1‑0.3倍(kg/kg)，所述层析柱的高径比为5‑8：1，所述陶瓷膜滤液通过氧化铝或氧化镁层析柱的流速为0.5‑2.0BV/小时。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述萃取是用低极性有机溶剂萃取，所述低极性有机溶剂选自石油醚、乙醚、6#溶剂油、120#溶剂油、乙酸乙酯、环己烷、正己烷、庚烷中的至少一种；所述低极性有机溶剂的体积用量为罗汉果根原料重量的5‑10倍，单位为L/kg。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述通过色谱进行分离，采用高压制备液相色谱柱，柱压为5‑15Mpa；色谱填料的粒径为5‑20μm；所述色谱填料的体积用量为罗汉果总酸样品重量的20‑40倍，单位为L/kg；所述色谱填料装柱的高径比为2‑5：1；所述流动相洗脱的流速为20‑40BV/小时，优选地，高压制备液相色谱柱的柱压为10‑12Mpa，色谱填料的粒径为10‑15μm，色谱填料装柱的高径比为2.5‑3：1流动相洗脱的流速为20‑25BV/小时；进一步优选地，所述填料为聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚羟基甲基丙烯酸酯或聚乙烯醇。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱是采用流动相I洗脱依次得到罗汉果酸乙、罗汉果酸甲；流动相II洗脱依次得到罗汉果酸丁、罗汉果酸丙。所述流动相I为醇‑水混合溶液，其中醇体积分数为15‑20％；流动相II为醇‑水‑醋酸混合溶液，醇体积分数为25‑35％，醋酸体积分数为0.2‑1％；优选地，在柱压为10‑12Mpa，色谱填料的粒径为10‑15μm，色谱填料装柱的高径比为2.5‑3：1流动相洗脱的流速为20‑25BV/小时的洗脱条件下，从洗脱开始计时，收集第16‑22min为罗汉果酸乙馏分；收集第26‑