一种用于外泌体生产制备的系统及其制备外泌体的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113388515A(43)申请公布日2021.09.14(21)申请号202110558560.9(22)申请日2021.05.21(71)申请人瑞太生物科技（沈阳）有限公司地址110000辽宁省沈阳市浑南区上深沟村858-1号沈阳国际软件园B1号楼501-3室(72)发明人张海心(74)专利代理机构北京知呱呱知识产权代理有限公司11577代理人杜立军(51)Int.Cl.C12M3/00(2006.01)C12M1/12(2006.01)C12N5/00(2006.01)C12N5/0775(2010.01)权利要求书1页说明书5页附图4页(54)发明名称一种用于外泌体生产制备的系统及其制备外泌体的方法(57)摘要本发明公开了一种用于外泌体生产制备的系统及其制备外泌体的方法，具体涉及生物医药领域。所述方法包括细胞培养和外泌体提取两部分。所述系统包括第一储存罐、第二储存罐、中空纤维细胞培养装置、切向流过滤装置、第一蠕动泵和第二蠕动泵。可应用于外泌体的工业化大规模生产制备。本发明提供的系统利用中空纤维装置中的大量的中空纤维管，增大了细胞培养面积，通过中空纤维管输送的培养基可促使细胞大量分泌外泌体，产出的外泌体溶液通过切向流过滤装置进行纯化，操作简单，回收率高，无中间污染的高纯度、高浓度的外泌体溶液。利用本发明的系统可以实现从细胞培养到外泌体生产的一体化制备流程，非常适合临床级的外泌体工业化大规模生产制备。CN113388515ACN113388515A权利要求书1/1页1.一种用于外泌体制备的方法，其特征在于，所述方法包括中空纤维细胞培养装置的细胞的培养和切向流过滤装置对外泌体的提取纯化。2.根据权利要求1所述用于外泌体制备的方法，其特征在于，所述方法包括：步骤一，将培养基加入第一储存罐中，开启第一蠕动泵，将第一储存罐的培养基注满中空纤维细胞培养装置后，关闭第一蠕动泵；步骤二，将细胞通过中空纤维细胞培养装置的接种孔接种至中空纤维细胞培养装置中，25℃培养8‑14h，使其充分贴壁在中空纤维管表面；步骤三，开启第一蠕动泵，将第一储存罐中的培养基泵入中空纤维细胞培养装置中，同时含有外泌体的培养液流入第二储存罐内；步骤四，收集外泌体溶液，开启第二蠕动泵，将第二储存罐中的外泌体泵入切向流过滤装置中，进一步对外泌体进行提取纯化；步骤五，待第二储存罐中的液体体积浓缩至最小运行体积时，向第二储存罐中加入无菌PBS缓冲液，继续将第二储存罐中的液体泵入切向流过滤装置中，循环浓缩过滤，收集第二储存罐中的液体，即得到提取纯化的外泌体溶液。3.根据权利要求2所述用于外泌体制备的方法，其特征在于，所述步骤一中，所述培养基中的营养成分的分子量小于20KD。4.根据权利要求2所述用于外泌体制备的方法，其特征在于，所述步骤二中，所述细胞包括体细胞和干细胞及所述干细胞诱导分化的细胞。5.根据权利要求2所述用于外泌体制备的方法，其特征在于，所述步骤二中，所述细胞的接种量为106‑108个。6.根据权利要求2所述用于外泌体制备的方法，其特征在于，所述步骤五中，所述切向流过滤装置的最小运行体积为50‑500mL。7.一种用于权利要求1‑6任一所述方法制备外泌体的系统，其特征在于，所述系统包括第一储存罐、第二储存罐、中空纤维细胞培养装置、切向流过滤装置、第一蠕动泵和第二蠕动泵；其中，第一储存罐的出口经第一蠕动泵与中空纤维细胞培养装置的入口连接，中空纤维细胞培养装置的出口与第一储存罐的入口连接，中空纤维细胞培养装置滤液出口与第二储存罐的第一入口连接；第二储存罐的出口经第二蠕动泵与切向流过滤装置的入口连接，切向流过滤装置的出口与第二储存罐的第二入口连接，经切向流过滤装置过滤后的液体直接流出体系。8.根据权利要求7所述一种用于外泌体制备的系统，其特征在于，所述中空纤维细胞培养装置内部设有指标检测系统，包括pH检测模块、温度检测模块和溶氧检测模块；外壳设有透明可视窗。9.根据权利要求7所述一种用于外泌体制备的系统，其特征在于，所述中空纤维细胞培养装置内部设有中空纤维管，所述中空纤维管的截留分子量为20‑75KD；所述切向流过滤装置设有切向流过滤膜，所述切向流过滤膜的截留分子量为50‑750KD。2CN113388515A说明书1/5页一种用于外泌体生产制备的系统及其制备外泌体的方法技术领域[0001]本发明涉及物医学技术领域，具体涉及一种用于外泌体生产制备的系统及其制备外泌体的方法。背景技术[0002]外泌体是有活细胞分泌的磷脂双分子层结构的小囊泡，直径在30‑150nm，密度在1.13‑1.19g/ml，可存在于各种体液中，如血清、血浆、唾液、尿液、腹水、脊髓液、乳汁等。外泌体中含有多种生物分子，如