外泌体冻干粉制备方法及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114558031A(43)申请公布日2022.05.31(21)申请号202210277631.2C12N5/078(2010.01)(22)申请日2022.03.21(71)申请人南华大学地址421001湖南省衡阳市蒸湘区常胜西路28号(72)发明人喻翠云林玲魏华张海涛易玲晏霜(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227专利代理师张柳(51)Int.Cl.A61K35/16(2015.01)A61K35/19(2015.01)A61K9/19(2006.01)A61P17/14(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图3页(54)发明名称外泌体冻干粉制备方法及其应用(57)摘要本发明涉及生物制品领域，尤其涉及外泌体冻干粉制备方法及其应用。本发明提供了外泌体冻干粉的制备方法，包括以下步骤：取血液与抗凝剂混合，离心，收集中上层，获得血小板血浆；取上述血小板血浆离心，收集下层，获得富血小板血浆；取上述富血小板血浆与缓冲液混合，离心，获得上清液；取上述上清液过滤，收集上清，离心，收集沉淀，获得浓缩液；取上述浓缩液与冻干保护剂混合，过滤，收集滤液，冻干，获得冻干粉。本发明所提供的制备方法制得的外泌体冻干粉为一种生物产品冻干粉，来源于富血小板血浆，富含毛囊生长所需的生长因子，且冻干后极大程度保留了外泌体活性，便于储存和运输，能有效促进头发生长。CN114558031ACN114558031A权利要求书1/1页1.外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：取血液与抗凝剂混合，离心，收集中上层，获得血小板血浆；S2：取所述血小板血浆离心，收集下层，获得富血小板血浆；S3：取所述富血小板血浆与缓冲液混合，离心，获得上清液；S4：取所述上清液过滤，收集上清，离心，收集沉淀，获得浓缩液；S5：取所述浓缩液与冻干保护剂混合，过滤，收集滤液，冻干，获得冻干粉。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S1中所述混合的温度为20～25℃，所述离心的时间为5～10min，转速不大于400g。3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，S2中所述离心的温度为20～25℃，时间为10～20min，转速不大于400g。4.如权利要求1至3任一项所述的制备方法，其特征在于，S3中所述离心的转速为300～20000g，时间为10～30min，次数不少于4。5.如权利要求1至4任一项所述的制备方法，其特征在于，S4中所述离心的转速为100000～120000g，时间为60～90min，次数不少于2。6.如权利要求1至5任一项所述的制备方法，其特征在于，S5中所述冻干保护剂的终浓度为10～20％。7.如权利要求1至6任一项所述的制备方法，其特征在于，S5中所述混合的时间为20～50min。8.如权利要求1至7任一项所述的制备方法，其特征在于，所述冻干的时间为24～48h，温度为‑80℃。9.如权利要求1至8任一项所述的制备方法制得的外泌体冻干粉在治疗和/或预防脱发中的应用。10.如权利要求1至8任一项所述的制备方法制得的外泌体冻干粉在促进头发生长、毛囊再生和/或调节细胞周期中的一种或多种应用。2CN114558031A说明书1/7页外泌体冻干粉制备方法及其应用技术领域[0001]本发明涉及生物制品领域，尤其涉及外泌体冻干粉制备方法及其应用。背景技术[0002]生活节奏的加快以及人们作息饮食的不规律，脱发群体逐渐变大。头发是一种从头皮上生长出来的纤维组织，其不仅具有保温和保护头部免除外界伤害等功能，且对男性和女性来说都具有美学价值，在打造个人形象方面具有特殊的意义。国家卫健委在今年年初发布的报告显示，中国脱发人群已经超2.5亿，这个数字意味着每6个人当中就有一个人脱发。脱发是一种头发密度降低或头发变细的现象，或两者兼有之，它不利于表达美感，甚至导致抑郁或焦虑，因此从人类健康角度出发，脱发的治疗至关重要。[0003]治疗脱发的方法有很多，使用化学合成防脱生发剂、天然植物提取液添加剂、毛发移植技术和物理治疗等。然而，这些方法大多受到其非永久性、依耐性等限制，以广泛使用的生发剂非那雄胺和米诺地尔为例，米诺地尔效果持续性差，需要长久使用药物，而非那雄胺治疗时会损害神经类固醇的生物合成和功能，可能会导致男性的性欲丧失、乳房发育。由此可见，新型生发产品的开发将因此受到医药与化妆品邻域的极大重视。[0004]毛发的生长关键在于毛囊干细胞可受生长因子的调控分化为毛囊祖细胞。头发属于皮肤的附属器官，它起源于表皮，深入真皮。新毛干的产生取决于位于毛囊突起区域的干细胞被激活，激活后的干细胞下行至基质细胞，刺激毛囊基质细胞向毛干增殖和分化。毛干是由毛乳头上部的基质细胞快速增殖分化形成的。其中