一种野尻霉素的纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113929615A(43)申请公布日2022.01.14(21)申请号202111288086.9(22)申请日2021.11.02(83)生物保藏信息CGMCCNo.227812021.06.25(71)申请人浙江珲达生物科技有限公司地址310000浙江省杭州市钱塘新区白杨街道6号大街452号2幢D2014-2017号房(72)发明人张敏郑玲辉石磊彭湘屏高祥朱进伟陈世敏汪超(74)专利代理机构北京领科知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11690代理人张丹(51)Int.Cl.C07D211/46(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种野尻霉素的纯化方法(57)摘要本发明公开了一种1‑脱氧野尻霉素的提纯方法，该方法以产生1‑脱氧野尻霉素的解淀粉芽孢杆菌发酵液为原料，通过固液分离、脱色剂脱色、阴离子树脂层析、阳离子树脂层析和结晶，获得高纯度的1‑脱氧野尻霉素，收率高于50％。该方法具有操作简单、制备工时短和溶媒用量小等特点。CN113929615ACN113929615A权利要求书1/1页1.一种纯化1‑脱氧野尻霉素的方法，其特征在于包括以下步骤：1‑脱氧野尻霉素发酵液滤液进行阴离子树脂层析，之后进行阳离子树脂层析，之后使用醇溶液进行溶解结晶，即可得到1‑脱氧野尻霉素。2.如权利要求1中所述的纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将1‑脱氧野尻霉素发酵液固液分离，酸化后加入助滤剂，过滤收集滤液；(2)滤液加入脱色剂进行脱色，过滤收集滤液；(3)将步骤(2)所得滤液进行阴离子树脂层析，收集洗脱液；(4)将步骤(3)所得洗脱液进行阳离子树脂层析，使用氨水洗脱，收集pH9～12的洗脱液；(5)将步骤(4)所得洗脱液酸化至中性，减压蒸干，甲醇溶解得到结晶前液，低温搅拌结晶，过滤后固相真空干燥即可得1‑脱氧野尻霉素。3.如权利要求2中所述的纯化方法，其特征在于：步骤(1)中酸化液相使用盐酸，调节pH至3.0～4.0。4.如权利要求2中所述的纯化方法，其特征在于：步骤(1)中所述的助滤剂选自硅胶、中性氧化铝、纤维素和硅藻土，优选硅藻土。5.如权利要求2中所述的纯化方法，其特征在于：步骤(2)中所述的脱色剂为活性炭，与滤液的质量体积比为1％～2％，过滤使用0.22μm的水系膜。6.如权利要求2所述的纯化方法，其特征在于：步骤(3)中所述阴离子树脂为LX‑67，滤液与阴离子树脂体积比为1:9～1:4，使用纯水洗脱。7.如权利要求2所述的纯化方法，其特征在于：步骤(4)中所述阳离子树脂为LX‑712，氨水的洗脱浓度为0.2～0.5mol/L，洗脱速度为1～2BV/h。8.如权利要求7所述的纯化方法，其特征在于：步骤(4)中所述洗脱液与阳离子树脂体积比为1:8～1:1。9.如权利要求2所述的纯化方法，其特征在于：步骤(5)中所述洗脱液酸化使用盐酸，调节pH至6.5～7.5，低温搅拌结晶为2～8℃下搅拌结晶12～18h。10.如权利要求9所述的纯化方法，其特征在于：步骤(5)中所述甲醇溶解得到的结晶前液浓度为20g/L～32g/L。11.如权利要求2中所述的纯化方法，其特征在于：步骤(1)中1‑脱氧野尻霉素发酵液为产生1‑脱氧野尻霉素的解淀粉芽孢杆菌发酵液。12.如权利要求11中所述的纯化方法，其特征在于：所述的产生1‑脱氧野尻霉素的解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌HDCC00252。2CN113929615A说明书1/5页一种野尻霉素的纯化方法技术领域[0001]本发明涉及微生物发酵纯化技术领域，具体为一种1‑脱氧野尻霉素的纯化方法。背景技术[0002]1‑脱氧野尻霉素(1‑deoxynojirimycin，1‑DNJ)是一种天然存在的多羟基哌啶生物碱,化学名称为3,4,5‑三羟基‑2‑羟甲基四氢吡啶，天然存在于桑树的枝、叶和根部以及蚕的幼虫和蚕蛹等。1‑DNJ对α‑葡萄糖苷酶和α‑淀粉酶具有强烈的抑制作用，能够延缓餐后小肠对糖的吸收，达到抑制糖尿病人餐后血糖升高的目的。基于其强有力的糖苷酶抑制活性，野尻霉素可用于治疗糖尿病及糖尿病并发症、肥胖症和相关的机能紊乱等,此外，1‑DNJ也可用于食品领域，以桑叶为原料的食品，作为功能性降糖的产品在日本等东亚国家已经允许上市销售，显示出1‑DNJ在保健食品领域的广阔前景。[0003][0004]最常见的1‑DNJ来源为从桑叶中进行提纯。中国专利CN102276515A公开了以桑叶、桑枝、桑白皮为原料提取纯化野尻霉素的方法，该方法主要将原料的浸提液通过阳离子交换层析、凝胶层析，三氧化二铝柱层析，并结合中间体催化转化技术，其1‑DNJ纯度可以控制在10％、50％、90％、99％四个级别；中国专利CN10