一种春雷霉素的纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109666051A(43)申请公布日2019.04.23(21)申请号201710965305.X(22)申请日2017.10.17(71)申请人福州奥尼多生物科技有限公司地址350015福建省福州市马尾区福州保税区综合大楼15层A区-2219（自贸试验区内）(72)发明人乐占线秦建萍乐景青陈秀明王祥开(74)专利代理机构福州市景弘专利代理事务所(普通合伙)35219代理人林祥翔徐剑兵(51)Int.Cl.C07H1/06(2006.01)C07H15/207(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图2页(54)发明名称一种春雷霉素的纯化方法(57)摘要本发明提供一种春雷霉素的纯化方法，所述的方法包括如下步骤:1)含有春雷霉素的清液制备；2)层析介质预处理；3)上样；4)洗脱；5)浓缩结晶。采用本发明纯化春雷霉素，具有纯度高、收率高、绿色环保的有益效果。CN109666051ACN109666051A权利要求书1/1页1.一种春雷霉素的纯化方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤:1)含有春雷霉素的清液制备：用盐酸将链霉菌发酵液的pH调至3.0～4.0；然后向发酵液中加入高岭土助滤剂搅拌并静置，固液分离过滤得清液；2)层析介质预处理：将酸液浸泡活化的阳离子交换树脂装柱，用去离子水将阳离子交换树脂洗涤至中性，然后再用pH为11的氨水洗涤直至流出液的pH为10～11，再用去离子水将阳离子交换树脂洗涤至中性备用；3)上样：将步骤1)中的清液通过步骤2)预处理后的层析介质，再用0.01mol/L盐酸洗脱3～5个柱体积；4)洗脱：将步骤3)上完样的层析柱用0.01mol/L～0.1mol/L氨水洗脱，收集颜色较浅的解析液，再用盐酸将解析液的pH调至3.5～4.5；5)浓缩结晶：将步骤4)制备的解析液用截留分子量不大于200的聚醚砜纳滤膜进行浓缩，待浓缩至原体积十分一后按一比一体积加入pH为4的盐酸水洗2～3次以除去多余的铵盐，继续浓缩并降温或者加入有机溶剂直至春雷霉素完全结晶析出，固液分离得到白色结晶物即为春雷霉素。2.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤1)静置时间为20min。3.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤1)中高岭土助滤剂的加入量占链霉菌发酵液重量比的0.1％。4.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤1)搅拌时间为10min。5.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤2)浸泡阳离子交换树脂的酸液pH为1.0。6.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤2)所述的阳离子交换树脂为磺酸根强阳离子交换树脂或者上海华震树脂科技有限公司生产的HZ008型号阳离子交换树脂。7.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤3)协调控制以下三个参数：清液通过层析介质的流速、阳离子交换树脂的使用量、层析柱的连接方式，避免清液因接近吸附或操作不当饱和时流出层析柱。8.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤4)先用氨水洗脱2～3个柱体积，然后继续解析，收集含有春雷霉素的第4～8个柱体积的解析液。9.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤5)中当春雷霉素浓缩60mg/ml～100mg/ml时采取降温的方式结晶析出春雷霉素。10.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤5)中当春雷霉素浓缩40mg/ml～100mg/ml时采取加入乙醇或丙酮有机溶剂结晶析出春雷霉素。2CN109666051A说明书1/6页一种春雷霉素的纯化方法技术领域[0001]本发明涉及微生物源生物杀菌剂领域，特别涉及一种春雷霉素的纯化方法。背景技术[0002]春雷霉素是放线菌产生的代谢产物，属内吸抗生素，兼有治疗和预防作用，纯品为白色针状结晶固体，在常温下稳定，在酸性和中性条件下稳定，在碱性条件下易分解。春雷霉素是防治多种细菌和真菌性病害的理想药剂，有预防、治疗、生长调剂功能。它既是防治稻瘟病的专用抗生素外，还对水稻细条病，柑橘流胶病，砂皮病，猕猴桃溃疡病，辣椒细菌性疮痂病，芹菜早疫病，菜豆昏枯病，菱白胡麻斑病，黄瓜炭疽病、细菌性角斑病、西红柿叶霉病、灰霉病，甘蓝黑腐病、黄瓜枯萎病等有好的防治效果。[0003]在CN201410707264.0《一种春雷霉素发酵培养基及发酵方法》中也公开了一种发酵培养基及发酵方法，从中可以知道，为了达到工业化规模生产，在大的发酵罐中都需要加入不同类型的表面活性剂和消泡剂等，同时培养基中也含有大量营养物如豆饼粉、豆油、玉米淀粉、淀粉酶等，这些经过微生物代谢，会产生复杂的初级代谢产物如核苷酸类、氨基酸等，也产生水溶性的胞外次级