一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114107569A(43)申请公布日2022.03.01(21)申请号202111613985.1(22)申请日2021.12.27(71)申请人苏州良辰生物医药科技有限公司地址215600江苏省苏州市张家港市华昌路沙洲湖科创园D1幢11楼、12楼（良辰）(72)发明人汪涛范培培(74)专利代理机构苏州创元专利商标事务所有限公司32103代理人周敏(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6851(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图4页(54)发明名称一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针及试剂盒(57)摘要本发明提供一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针。所述的引物包括上游引物和下游引物，其特征在于：所述的上游引物的序列为5’‑ACGCCAACAACGGACCACAT‑3’，或与其具有至少80％同源性的序列；所述的下游引物的序列为5’‑TAGTCGCGATGCTGCTGACG‑3’，或与其具有至少80％同源性的序列；所述的探针的序列为5’‑GCGTTTGGATCTGCGCCGTG‑3’，或与其具有至少80％同源性的序列。采用本发明的引物探针进行荧光定量PCR检测牛痘病毒，具有简单快速、检测灵敏度高、准确性好、特异性强、收率高、重复性好等优点。CN114107569ACN114107569A权利要求书1/1页1.一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，所述的引物包括上游引物和下游引物，其特征在于：所述的上游引物的序列为5’‑ACGCCAACAACGGACCACAT‑3’，或与其具有至少80％同源性的序列；所述的下游引物的序列为5’‑TAGTCGCGATGCTGCTGACG‑3’，或与其具有至少80％同源性的序列；所述的探针的序列为5’‑GCGTTTGGATCTGCGCCGTG‑3’，或与其具有至少80％同源性的序列。2.根据权利要求1所述的快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，其特征在于，所述的引物扩增片段大小为180～185bp。3.根据权利要求1所述的快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，其特征在于，所述的上游引物的长度、所述的下游引物的长度和所述的探针的长度独立地为18～22bp。4.根据权利要求1所述的快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，其特征在于，所述的上游引物的GC含量为50～60％；所述的下游引物的GC含量为55～65％；所述的探针的GC含量为60～70％。5.根据权利要求1所述的快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，其特征在于，所述的探针的5’端连接有荧光报告基团，所述的探针的3’连接有荧光淬灭基团。6.根据权利要求5所述的快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，其特征在于，所述的荧光报告基团为FAM；所述的荧光淬灭基团为TAMRA或BHQ。7.一种快速鉴别牛痘病毒的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括权利要求1至6中任一项所述的引物、探针。8.根据权利要求7所述的快速鉴别牛痘病毒的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括DNA标准品，所述的DNA标准品的序列为ACGCCAACAACGGACCACATCCTTCTTCATCAACCGAGTTGTTAATCTTGGCTCCATACTGTACCAATAAATTTATTCTCTCTATGACTTCATCATCTGTTCCCGAGAGATAATATAGAGGTGTTTTATTATGTTTATCACACGCGTTTGGATCTGCGCCGTGCGTCAGCAGCATCGCGACTA。9.一种如权利要求1至6中任一项所述的引物、探针和/或如权利要求7或8所述的试剂盒在检测生物制品中牛痘病毒中的应用。10.一种快速鉴别牛痘病毒的方法，其特征在于，所述的方法为以待检测生物制品中的DNA为模板，采用引物、探针进行荧光定量PCR反应，采集荧光信号以确定所述的待检测生物制品中的牛痘病毒的含量，所述的引物、探针为权利要求5所述的引物、探针。2CN114107569A说明书1/6页一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针及试剂盒技术领域[0001]本发明涉及生物试剂盒技术领域，尤其涉及一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针及试剂盒。背景技术[0002]在生物制品的生产过程中，需要使用特定方法去除或灭活部分病毒活性，从而保证该生物制备在临床使用中的安全性。为了检测病毒去除或灭活效果，需要使用一些检测方法对生物制品进行检测。痘病毒作为生物制品病毒安全性评价的一个重要指标，其标志病毒牛痘病毒的快速检测成为安全性评价中的重要环节。常规的生物制品安全评价方法中，多使用传统检测方法，例如细胞实验、动物抗体产生实验，存在操作复杂、耗时长、误差大以及成本高等问题，严重限制生物制品的生产推广。荧光定量PCR技术能够缩短实验周期，