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本发明涉及一种用于鉴别人苍白杆菌的引物、探针组合及检测试剂盒。本发明采用三个基因、双荧光基团标记的一步法荧光定量PCR检测技术,可以检测与鉴定纯菌及血液等标本中苍白杆菌属和人苍白杆菌种菌株核酸DNA,灵敏度高,可检测到3.67fg的核酸DNA(Ct值为35.38),即PCR反应体系只要有1个核酸DNA拷贝数即能检出。采用三个基因同时检测,极大的提高血液等标本中苍白杆菌属和人苍白杆菌核酸DNA的检出率。本试剂盒操作简单,不需要凝胶电泳,标本细菌基因组DNA提取后,1个小时即可报告检测与鉴定结果,尤其适合血液等微量核酸DNA的检测与鉴定。