免疫肽及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114106107A(43)申请公布日2022.03.01(21)申请号202111371339.9(22)申请日2021.11.18(71)申请人珀瑅（浙江）生物科技有限公司地址311305浙江省杭州市临安区青山湖街道市地街33号5幢五层西侧南面(72)发明人马晓瑛陈炳国丁霞林学仁(51)Int.Cl.C07K14/00(2006.01)C12N15/70(2006.01)C12N1/21(2006.01)C07K1/18(2006.01)C12R1/19(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表2页附图2页(54)发明名称免疫肽及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种免疫肽及其制备方法，该免疫肽含有SEQIDNO.1‑5所示氨基酸序列中的任意一种。本发明公开的免疫肽具有更好的抗菌活性、更低的溶血性，同时其具有毒性低、稳定性强的特点，同时该免疫肽的肽链长度短，生产成本低，此外，本发明提供的制备方法收率高，所制备的免疫肽纯度高。CN114106107ACN114106107A权利要求书1/1页1.一种免疫肽，其特征在于，其氨基酸序列选自SEQIDNO.1‑5中的任意一种。2.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码如权利要求1所述的免疫肽；优选地，核苷酸序列如SEQIDNO.6所示。3.一种载体，其特征在于，其含有权利要求2所述的核酸分子；所述载体的骨架为pET‑28a；所述核酸分子位于所述载体的NcoI酶切位点和XhoI酶切位点之间。4.一种重组细胞，其特征在于，其含有权利要求3所述的载体。5.根据权利要求4所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞为大肠杆菌BL21（DE3）。6.一种制备如权利要求1所述的免疫肽的方法，其特征在于，其包括：培养权利要求5所述的重组细胞。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法包括：在培养所述重组细胞的培养液的OD600达到0.5‑1.5时，加入诱导剂进行诱导培养；诱导培养的温度为28‑32℃，诱导培养的时间6‑8h；诱导剂为IPTG；诱导剂在培养液中的浓度控制为0.1‑1mM。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，当重组细胞为大肠杆菌时，所述方法包括：在培养结束后，收集菌体对其进行离心、重悬、超声破碎、再离心，收集上清液,优选地，阳离子层析所用的层析介质为SP‑SepharoseFastFlow介质；优选地，所述洗脱溶液含NaCl的Tris‑HCl溶液；优选地，上述洗脱液进行HPLC制备，收集纯度高的洗脱峰；优选地，所述方法还包括：采用截留分子量为1KD的透析膜对所述HPLC制备样品进行透析、脱盐、换液，得到所述免疫肽。2CN114106107A说明书1/6页免疫肽及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及免疫肽（Mactide）及其制备方法。背景技术[0002]免疫肽是一类具有抗菌活性的生物短肽，氨基酸数目小于100，常带正电荷，并具广谱抗菌性的一类小肽，是生物体免疫防御系统产生的一类对抗外源性病原体致病作用的防御性多肽活性物质，是生物体先天免疫的重要组成成分，与干扰素、补体等组成了宿主的免疫防御系统，这类生物活性小分子是非专一性的免疫应答产物，具有广谱抗菌作用，它对革兰阳性菌、革兰阴性菌、真菌均有抑杀作用，却不破坏动物体内的正常细胞。[0003]免疫肽具有杀菌快速、抗菌谱广、毒副作用小、无免疫原性等优点。并且，由于其特殊的杀菌机理，被抑制或杀灭的病原性微生物不会产生抗性菌株，不会由于耐药性而减弱杀灭细菌的作用。[0004]诸多研究显示天然多肽生产工艺存在瓶颈，产品的抗菌活性及稳定性不理想。因此，需要对天然多肽进行改造，保持其已有的抗菌活性，并大程度地减小毒性，增强稳定性，同时通过缩短肽链长度以实现成本低化。[0005]鉴于此，特提出本发明。发明内容[0006]本发明的目的在于提供一种免疫肽及其制备方法。本发明提供的免疫肽（Mactide）是一种新型抗菌类多肽，具有更好的抗菌活性、更低的溶血性、稳定性强，另外该免疫肽的肽链长度短，生产成本低，此外，本发明提供的制备方法收率高，所制备的免疫肽纯度高。[0007]本发明是这样实现的：第一方面，本发明提供一种免疫肽（Mactide），其氨基酸序列选自SEQIDNO.1‑5中的任意一种：序号编码氨基酸序列1SEQIDNO.1MRKRKRKRKKYKPIIVPIIRK2SEQIDNO.2MRKEKRKRKKYEPIIVPIIRK3SEQIDNO.3RKEKRKRKKYEPIIVPIIRK4SEQIDNO.4GKEKRKRKKYEPIIVPIIRK5SEQIDNO.5MGRKEKRKRKKYEPIIVPIIRK本发明提供的SE