一种免疫调节肽及其制备方法与应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115927518A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202211592873.7(22)申请日2022.12.13(71)申请人华南农业大学地址510642广东省广州市天河区五山路483号(72)发明人苗建银曾艳(74)专利代理机构广州市华学知识产权代理有限公司44245专利代理师张珍(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)A61K38/01(2006.01)A61P37/02(2006.01)A23L33/18(2016.01)权利要求书1页说明书10页附图8页(54)发明名称一种免疫调节肽及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了一种免疫调节肽及其制备方法与应用，属于生物技术领域。本发明方法包括如下步骤：棘胸蛙去除骨和内脏，取肉并清水洗净，切碎匀浆，得到棘胸蛙肉样品；将棘胸蛙肉样品与水混合，均质，加入蛋白酶进行酶解，得到酶解液；将酶解液中的蛋白酶灭活，终止酶解反应，离心，收集上清液，经过浓缩和冷冻干燥后获得免疫调节肽。本发明提供的棘胸蛙肉免疫调节肽具有发挥免疫活性的氨基酸组成基础，且表现出良好的细胞免疫活性，包括细胞增殖活性、吞噬能力和细胞因子分泌能力。本发明免疫调节肽可为潜在的免疫调节剂提供了一种新的原材料，可进一步用于开发功能性食品。CN115927518ACN115927518A权利要求书1/1页1.一种免疫调节肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、棘胸蛙去除骨和内脏，取肉并清水洗净，切碎匀浆，得到棘胸蛙肉样品；S2、将棘胸蛙肉样品与水混合，均质，加入蛋白酶进行酶解，得到酶解液；所采用的蛋白酶为中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶中的任意一种或多种，酶解条件为：温度35～55℃，pH6～8，酶解时间2～4h，酶底比0.1～0.5％；S3、将酶解液中的蛋白酶灭活，终止酶解反应，离心，收集上清液，经过浓缩和冷冻干燥后获得所述的免疫调节肽。2.根据权利要求1所述的免疫调节肽的制备方法，其特征在于：所采用的酶为中性蛋白酶，酶解条件为：温度38～42℃，pH6.5～7.5，酶解时间2～3h，酶底比0.2～0.4％。3.根据权利要求1所述的免疫调节肽的制备方法，其特征在于：所采用的酶为中性蛋白酶，酶解条件为：温度40℃，pH7.18～7.2，酶解时间2.45～2.5h，酶底比0.38～0.4％。4.根据权利要求1～3任一项所述的免疫调节肽的制备方法，其特征在于：步骤S1中调节pH所用的试剂为0.1mol/mL的NaOH溶液和HCl溶液。5.根据权利要求1～3任一项所述的免疫调节肽的制备方法，其特征在于：步骤S3中使蛋白酶灭活的方式为将酶解液置于沸水浴中水浴，时间为10±2min；步骤S3中离心的条件为4000±500r/min、30±5min。6.根据权利要求1～3任一项所述的免疫调节肽的制备方法，其特征在于：步骤S3中获得免疫调节肽后，冷冻备用，冷冻的温度为‑20±5℃。7.一种免疫调节肽，其特征在于：通过权利要求1～6任一项中所述的制备方法制备得到。8.权利要求7中所述的免疫调节肽在下述至少一种情况中的应用：(1)在提升巨噬细胞吞噬能力中的应用；(2)在制备巨噬细胞吞噬能力促进剂中的应用；(3)在促进巨噬细胞增殖中的应用；(4)在制备巨噬细胞增殖促进剂中的应用；(5)在提升巨噬细胞NO释放、IL‑6和/或TNF‑α分泌量中的应用；(6)在制备巨噬细胞NO释放、IL‑6和/或TNF‑α分泌促进剂中的应用；(7)在制备提升生物免疫力的药物中的应用；(8)在制备提升生物免疫力的食品配料中的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述的免疫调节肽的浓度为100～2000μg/mL；所述的免疫调节肽的作用时间为20～30h。10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述的免疫调节肽的浓度为1000～2000μg/mL；所述的免疫调节肽的作用时间为24h。2CN115927518A说明书1/10页一种免疫调节肽及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明属于属于生物技术领域，具体涉及一种免疫调节肽及其制备方法与应用。背景技术[0002]随着年龄的增长，人们不得不面对各种免疫缺陷疾病和免疫功能低下问题，这也使得免疫增强类药物的研究迫在眉睫，目前一些免疫增强类药物如咪喹莫特和左旋咪唑已经在临床上得到了应用。一方面，这些免疫增强类药物在一定程度上可以提高患者的免疫力，降低疾病感染的风险并辅助自身免疫病的治疗。另一放面，其副作用和经济成本也给人们带来不少的担忧。从天然成分中开发的具有免疫活性的提取物成为近年来研究的热点。如JinyangCai等从人β‑酪蛋白中提取分离的衍生肽BCCY‑1能够促进巨噬细胞的增殖