肿瘤细胞纳米金囊泡、免疫纳米金囊泡及制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110269935A(43)申请公布日2019.09.24(21)申请号201810207398.4(22)申请日2018.03.14(71)申请人华中科技大学地址430074湖北省武汉市洪山区珞喻路1037号(72)发明人张志平章丹(74)专利代理机构华中科技大学专利中心42201代理人许恒恒李智(51)Int.Cl.A61K41/00(2006.01)A61K39/00(2006.01)A61K9/127(2006.01)A61P35/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图9页(54)发明名称肿瘤细胞纳米金囊泡、免疫纳米金囊泡及制备方法与应用(57)摘要本发明公开了肿瘤细胞纳米金囊泡、免疫纳米金囊泡及制备方法与应用。该肿瘤细胞纳米金囊泡为外层囊泡和内核组成的核壳结构；外层囊泡为包裹内核的细胞膜；内核由纳米金粒子组成；外层囊泡携带有肿瘤细胞特异性抗原；肿瘤细胞免疫纳米金囊泡携带有肿瘤细胞特异性抗原的肽段，且保留免疫细胞的特性。本发明提供的肿瘤细胞生成的纳米金囊泡，在保持纳米金原光热治疗的基础上，同时赋予囊泡携带母细胞的肿瘤特异性抗原，刺激机体产生免疫应答，释放相关免疫细胞及因子对肿瘤进行免疫杀伤，同时激发系统免疫防御，抑制肿瘤转移，并长效抑制肿瘤的复发。携带的抗原信息经抗原提呈细胞处理后可进一步提呈给免疫细胞，从而诱导免疫应答，同时实现肿瘤的免疫治疗和光热治疗。CN110269935ACN110269935A权利要求书1/1页1.一种肿瘤细胞纳米金囊泡，其特征在于，该肿瘤细胞纳米金囊泡为外层囊泡和内核组成的核壳结构；所述外层囊泡为包裹所述内核的细胞膜；所述内核由纳米金粒子组成；所述外层囊泡携带有肿瘤细胞特异性抗原。2.如权利要求1所述的肿瘤细胞纳米金囊泡，其特征在于，所述内核的直径为25nm-40nm；所述细胞膜的厚度为5nm-12nm。3.一种肿瘤细胞免疫纳米金囊泡，其特征在于，该肿瘤细胞免疫纳米金囊泡为外层囊泡和内核组成的核壳结构；所述外层囊泡为包裹所述内核的细胞膜；所述内核由纳米金粒子组成；所述外层囊泡携带有肿瘤细胞特异性抗原的肽段。4.如权利要求3所述的肿瘤细胞免疫纳米金囊泡，其特征在于，所述内核的直径为25nm-40nm；所述细胞膜的厚度为6nm-12nm。5.一种肿瘤细胞纳米金囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将含有三价金离子的溶液加入肿瘤细胞中，孵育72h-120h；所述肿瘤细胞的培养液为不添加血清的培养液，用于纳米金在肿瘤细胞内生成，同时刺激肿瘤细胞胞吐；(2)收集步骤(1)所述肿瘤细胞胞吐的肿瘤细胞纳米金囊泡：将步骤(1)中孵育后的肿瘤细胞以800rpm-3000rpm的转速离心5min-10min，保留上清液；将所述上清液以8000rpm-13000rpm的转速离心30min-90min，弃上清后将沉淀用缓冲液清洗重悬，即得到肿瘤细胞纳米金囊泡。6.如权利要求5所述的肿瘤细胞纳米金囊泡的制备方法，其特征在于，步骤(1)中将含有三价金离子的溶液加入肿瘤细胞后，所述三价金离子的浓度为0.5mM-1mM；步骤(1)所述肿瘤细胞的个数为0.3×107-1×107；优选地，步骤(1)所述含有三价金离子的溶液为氯金酸溶液、氯金酸水合物溶液或氯化金溶液。7.一种肿瘤细胞免疫纳米金囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将权利要求5得到的肿瘤细胞纳米金囊泡加入到在不添加血清的培养液中培养的免疫细胞中，孵育6h-8h后，将所述免疫细胞的培养液重新更换为不添加血清的培养液，继续孵育24h-48h，刺激所述免疫细胞胞吐；(2)收集步骤(1)所述免疫细胞胞吐的肿瘤细胞免疫纳米金囊泡：将步骤(1)中孵育后的免疫细胞以800rpm-3000rpm的转速离心5min-10min，保留上清液；将所述上清液以10000rpm-20000rpm的转速离心30min-90min，弃上清后将沉淀用缓冲液清洗重悬，即得到肿瘤细胞免疫纳米金囊泡。8.如权利要求7所述的肿瘤细胞免疫纳米金囊泡的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的肿瘤细胞纳米金囊泡的质量为20μg-50μg，步骤(1)所述的免疫细胞的个数为2×106-7×106；步骤(1)所述的免疫细胞为树突状细胞、巨噬细胞、中性粒细胞或淋巴细胞；优选地，所述步骤(1)中，将免疫细胞培养液重新更换为不添加血清的培养液之后，还包括用紫外光照射所述免疫细胞0.5h-2h。9.如权利要求1-2所述的肿瘤细胞纳米金囊泡在制备抗肿瘤药物上的应用。10.如权利要求3-4所述的肿瘤细胞免疫纳米金囊泡在制备抗肿瘤药物上的应用。2CN110269935A说明书1/6页肿瘤细胞纳米金囊泡、免疫纳米金囊泡及制备