负载聚多巴胺纳米颗粒的细胞外囊泡及制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115737826A(43)申请公布日2023.03.07(21)申请号202211088658.3A61P9/10(2006.01)(22)申请日2022.09.07A61P29/00(2006.01)A61P39/06(2006.01)(71)申请人中国人民解放军总医院第二医学中心地址100071北京市海淀区复兴路28号(72)发明人曹丰张阳刘鐘阳(74)专利代理机构北京天方智力知识产权代理事务所(普通合伙)11719专利代理师路远(51)Int.Cl.A61K47/46(2006.01)A61K9/50(2006.01)A61K31/785(2006.01)A61K31/4045(2006.01)A61K35/15(2015.01)权利要求书1页说明书6页附图2页(54)发明名称观的应用前景。负载聚多巴胺纳米颗粒的细胞外囊泡及制备方法(57)摘要本发明公开了一种负载聚多巴胺的细胞外囊泡及制备方法，该纳米靶向治疗平台包括源自M2型RAW264.7巨噬细胞的细胞外囊泡和被包裹在所述细胞外囊泡内作为有效治疗成分的聚多巴胺纳米颗粒。本发明的纳米靶向治疗平台通过使用IL‑4和IL‑10细胞因子处理RAW264.7巨噬细胞，使其极化为M2型巨噬细胞后，再将聚多巴胺纳米颗粒与M2型巨噬细胞共孵育，并经挤压法直接获取直径在200nm左右的负载聚多巴胺纳米颗粒的细胞外囊泡。本发明提供的细胞外囊泡‑聚多巴胺纳米靶向治疗平台可以应用在制备动脉粥样硬化抗炎药物或制剂中，不仅制备的负载聚多巴胺纳米颗粒的细胞外囊泡具有尺寸可控的优势，同时提高了聚多巴胺纳米颗粒在体内的滞留时间，还可使其在动脉粥样硬化病变部位富集，具有靶向炎症区域的能力，可以获得良好的CN115737826A抗炎效果，在动脉粥样硬化的治疗中具有非常客CN115737826A权利要求书1/1页1.一种负载聚多巴胺的细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：通过使用IL‑4和IL‑10细胞因子处理RAW264.7巨噬细胞，使其极化为M2型巨噬细胞；将聚多巴胺纳米颗粒与M2型巨噬细胞共孵育后，获取负载聚多巴胺纳米颗粒的来源于M2型巨噬细胞的具有靶向炎症区域的细胞外囊泡。2.根据权利要求1所述的负载聚多巴胺纳米颗粒细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，所述的获取负载聚多巴胺纳米颗粒的来源于M2型巨噬细胞的具有靶向炎症区域的细胞外囊泡通过尺寸连续挤压法连续挤压与聚多巴胺纳米颗粒共孵育的M2型巨噬细胞获得。3.根据权利要求2所述的负载聚多巴胺纳米颗粒细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，将聚多巴胺纳米颗粒负载于所述的细胞外囊泡采用的是尺寸连续挤压法。4.根据权利要求1所述的负载聚多巴胺纳米颗粒细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，所述的M2型巨噬细胞经IL‑4和IL‑10细胞因子处理RAW264.7巨噬细胞后获得，以至少1×107个细胞/ml的细胞数量与100ug/mL的聚多巴胺纳米颗粒共同孵育在细胞培养箱中。5.根据权利要求1所述的负载聚多巴胺纳米颗粒细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，所述的将聚多巴胺纳米颗粒负载于所述的纳米细胞外囊泡具体包括如下步骤：将聚多巴胺纳米颗粒添加进M2型巨噬细胞培养体系中共孵育后，使用细胞刮刀将细胞收集，并使用微型挤压器将细胞悬浮液依次通过1μm、400nm和200nm聚碳酸酯膜挤出，连续挤出五到六次后，使用PBS清洗并离心，以去除未被负载的聚多巴胺纳米颗粒，最后获取的即为负载聚多巴胺纳米颗粒的细胞外囊泡。6.一种负载聚多巴胺纳米颗粒的细胞外囊泡，其特征在于，所述的负载聚多巴胺纳米颗粒的细胞外囊泡由权利要求1‑5任一项所述的制备方法制备而得。2CN115737826A说明书1/6页负载聚多巴胺纳米颗粒的细胞外囊泡及制备方法技术领域[0001]本发明涉及动脉粥样硬化治疗的技术领域，具体涉及一种细胞外囊泡‑聚多巴胺纳米靶向治疗平台，即负载聚多巴胺纳米颗粒的细胞外囊泡及制备方法。背景技术[0002]本发明对于背景技术的描述属于与本发明相关的相关技术，仅仅是用于说明和便于理解本发明的发明内容，不应理解为申请人明确认为或推定申请人认为是本发明在首次提出申请的申请日的现有技术。[0003]动脉粥样硬化是心血管疾病的主要诱因，心血管疾病是全球发病率和死亡率的主要原因之一。炎症不仅是动脉粥样硬化的关键指标，而且还推动了整个疾病的进展。因此，抗炎被认为是治疗动脉粥样硬化的一种有前途的策略。[0004]然而抗炎药物缺乏针对炎症部位的特异性靶向能力，通常半衰期较差，不仅影响其实际治疗效果，而且会产生许多副作用，甚至导致死亡。而具有抗炎功效的纳米材料，也因为自身的免疫原性、毒性和生物分布问题，在炎症治疗中的应用受到限制。发明内容[0