一种碱基编辑工具.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115772523A(43)申请公布日2023.03.10(21)申请号202211602322.4C12N9/12(2006.01)(22)申请日2021.08.10C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)(62)分案原申请数据C12N15/85(2006.01)202110911545.82021.08.10(71)申请人珠海舒桐医疗科技有限公司地址519013广东省珠海市横琴新区粤澳合作中医药产业园豆蔻路36号2栋404室(72)发明人谢红娴(74)专利代理机构苏州创元专利商标事务所有限公司32103专利代理师周敏(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)权利要求书1页说明书9页C12N9/22(2006.01)序列表（电子公布）附图5页(54)发明名称一种碱基编辑工具(57)摘要本发明涉及一种碱基编辑工具。为了提高现有PE2系统目标碱基编辑效率和精准度，本发明提供一种新的碱基编辑工具，所述的碱基编辑工具包括SunTag系统和PE2系统。本发明首次利用SunTag系统和PE系统结果，采用SunTag系统和编辑效率更高的PE2版本，构建SunTag‑PE2系统，经优化后，在HEK293T细胞上和原始的PE2系统进行比较，所述的碱基编辑工具能够进一步提高PE2系统编辑的准确性，增强编辑精准度，为基因编辑提供更多的选择，该技术将推动我国及全世界在生命科学研究、农业生产和生物医药等领域的快速发展，具有重要的应用价值。CN115772523ACN115772523A权利要求书1/1页1.一种碱基编辑工具，其特征在于：所述的碱基编辑工具采用SunTag系统和PE2系统相结合形成，所述的SunTag系统包括能够被单链可变片段scFv识别的GCN4多肽，所述的PE2系统包括pegRNA、仅有单链DNA切口酶活性的Cas9切口酶、逆转录酶以及与所述的逆转录酶连接形成融合蛋白的单链可变片段scFv，所述的pegRNA的序列包括sgRNA序列、引物结合序列、以及转录模板序列；其中，所述的SunTag系统中有1～5个GCN4多肽与所述的PE2系统的Cas9切口酶的N端连接；和/或，所述的SunTag系统中有1～5个GCN4多肽与所述的PE2系统的Cas9切口酶的C端连接。2.根据权利要求1所述的碱基编辑工具，其特征在于：所述的PE2系统的Cas9切口酶的N端、C端中只有N端连接有所述GCN4多肽。3.根据权利要求1或2所述的碱基编辑工具，其特征在于：与所述的Cas9切口酶的N端连接的GCN4多肽的个数是1～3个。4.根据权利要求1所述的碱基编辑工具，其特征在于：连接在所述的Cas9切口酶的C端的GCN4多肽的个数是1～3个。5.根据权利要求1所述的碱基编辑工具，其特征在于：所述的融合蛋白与所述的pegRNA相连，然后与载体形成用于递送所述的pegRNA、逆转录酶和单链可变片段scFv的质粒；所述的Cas9切口酶和所述的GCN4多肽相连，然后与载体形成用于递送所述的Cas9切口酶和GCN4多肽的质粒。6.根据权利要求5所述的碱基编辑工具，其特征在于：用于递送所述的pegRNA、逆转录酶和单链可变片段scFv的质粒所使用的载体为pU6；和/或，用于递送所述的Cas9切口酶和GCN4多肽的质粒所使用的载体为pCMV。7.根据权利要求1所述的碱基编辑工具，其特征在于：用于连接所述Cas9切口酶和所述GCN4多肽的接头序列为flexiblelinker，和/或，用于连接所述的逆转录酶和所述的单链可变片段scFv的接头序列为flexiblelinker或GSlinker。8.根据权利要求7所述的碱基编辑工具，其特征在于：所述flexiblelinker的氨基酸序列如SEQIDNO.15所示，所述GSlinker的氨基酸序列(GGGS)nG，n为2～10之间的整数。9.根据权利要求1所述的碱基编辑工具，其特征在于：所述的GCN4多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.14所示。10.根据权利要求1所述的碱基编辑工具，其特征在于：所述的碱基编辑工具能够将如SEQIDNO.1所示的目标序列编辑为如SEQIDNO.2所示序列，采用的pegRNA序列如SEQIDNO.3所示。2CN115772523A说明书1/9页一种碱基编辑工具[0001]本发明是申请日为2021年8月10日、申请号为2021109115458、发明名称为一种碱基编辑工具及其构建方法的分案申请。技术领域[0002]本发明属于基因编辑技术领域，具体涉及一种碱基编辑工具。背景技术[0003]基因组编辑(简称为基因编辑)技术是利用人工核酸酶对基因组进行靶向修饰的遗传工程技术，是当今生命科学领域的研