一种基因重组VZV融合蛋白及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115819616A(43)申请公布日2023.03.21(21)申请号202210898208.4A61K39/385(2006.01)(22)申请日2022.07.28A61P31/22(2006.01)(66)本国优先权数据202110858776.72021.07.28CN(71)申请人江苏瑞科生物技术股份有限公司地址225300江苏省泰州市医药高新区杏林路28号疫苗工程中心A217室申请人北京安百胜生物科技有限公司(72)发明人胡颖嵩张元杰邓家荔姚文荣吴双洪坤学陈健平刘勇(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/85(2006.01)C12N5/10(2006.01)A61K39/25(2006.01)权利要求书1页说明书12页序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称一种基因重组VZV融合蛋白及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种基因重组水痘‑带状疱疹病毒融合蛋白及相应的制备方法和应用，所述融合蛋白是利用基因重组技术，将VZVgE蛋白的氨基酸第31‑546位(即gE1)与无毒性的毒素类载体蛋白或其功能活性片段串联重组，并添加了人工信号肽，构建了目的融合基因。经重组表达载体构建，转化，转染CHO细胞进行目的融合基因的表达，再经纯化得到了基因重组VZV融合蛋白。与单纯的VZVgE蛋白相比，基因重组VZV融合蛋白，尤其是基因重组VZV融合蛋白结合AS01B佐剂制备的基因重组VZV疫苗能够引起更高的抗体滴度，具有较好的免疫活性，诱导更强的细胞免疫，从而显著提升疫苗的免疫促进效果，且不存在引发潜在感染的风险。CN115819616ACN115819616A权利要求书1/1页1.一种基因重组VZV融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由水痘‑带状疱疹病毒抗原和毒素类载体蛋白串联重组构建而得。2.如权利要求1所述的基因重组VZV融合蛋白，其特征在于，所述水痘‑带状疱疹病毒抗原的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。3.如权利要求1所述的基因重组VZV融合蛋白，其特征在于，所述毒素类载体蛋白选自破伤风类毒素的多肽P2、P30、TTC或TT218，或白喉类毒素DT的无毒突变体CRM197中的一种，氨基酸序列如SEQIDNO：3‑7所示。4.如权利要求1‑3中任一项所述的基因重组VZV融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO：13‑17中任一所示。5.一种权利要求4所述的基因重组VZV融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、人工合成权利要求4所述的融合蛋白的基因序列，并将融合蛋白的基因连接入表达载体中，构建成重组表达质粒；S2、将构建的重组表达质粒转化宿主菌，通过双酶切鉴定和DNA测序，选取鉴定正确的重组质粒；S3、利用中国仓鼠卵巢细胞表达出基因重组VZV融合蛋白，对其进行纯化。6.如权利要求5所述的基因重组VZV融合蛋白的制备方法，其特征在于，S1中所述表达载体为pcDNA3.1(+)。7.如权利要求5所述的基因重组VZV融合蛋白的制备方法，其特征在于，S2中所述宿主菌为大肠杆菌DH5α。8.一种免疫原性组合物，其特征在于，所述免疫原性组合物包括权利要求4所述的融合蛋白。9.一种基因重组VZV疫苗，其特征在于，所述疫苗包括权利要求4所述的融合蛋白或权利要求8所述的免疫原性组合物，以及任选的可药用佐剂。10.如权利要求9所述的基因重组VZV疫苗，其特征在于，所述佐剂为铝盐类佐剂、弗氏完全佐剂、蜂胶佐剂、油水乳剂、细胞因子、CpG、DNA、基因工程减毒素、免疫刺激复合物或脂质体中的至少一种，优选地，所述脂质体佐剂为AS01B。2CN115819616A说明书1/12页一种基因重组VZV融合蛋白及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物医学领域，尤其是基因工程疫苗领域，特别是涉及一种由水痘‑带状疱疹病毒抗原和毒素类载体蛋白串联重组构建而得的融合蛋白及其制备方法和应用。背景技术[0002]水痘－带状疱疹病毒(varicella‑zostervirus，VZV)属疱疹病毒α亚科，为双链DNA病毒，约为125000bp，编码约70个开放阅读框。病毒核衣壳直径约80～120nm，呈二十面体，周围包绕一层内膜及一层部分来自细胞膜的包膜。VZV原发感染引起水痘，患儿的全身症状和皮疹消退以后有少量残存的病毒会终身潜伏于宿主的脊髓后根神经节、颅神经节和肠道神经节的神经细胞中。日后当机体免疫力降低时，潜伏在神经细胞中的病毒会被再激活，导致疼痛性的皮肤疾病——带状疱疹(herpeszoster，HZ)。[0003]对于水痘和带状疱疹，主要是对症处理，目前仍无特效治疗方法，抗病毒药物，如阿昔洛韦、伐昔洛韦、泛昔洛韦等，虽有