一种融合蛋白、制备方法及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115141283A(43)申请公布日2022.10.04(21)申请号202210233916.6A61P35/00(2006.01)(22)申请日2022.03.10A61P35/04(2006.01)A61P37/02(2006.01)(71)申请人厦门柏慈生物科技有限公司地址361000福建省厦门市翔安区莲亭路837号601单元(72)发明人梁耀极刘杰(74)专利代理机构厦门律嘉知识产权代理事务所(普通合伙)35225专利代理师张辉(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)A61K38/20(2006.01)A61K38/17(2006.01)A61K47/68(2017.01)A61K47/64(2017.01)权利要求书3页说明书23页序列表21页附图13页(54)发明名称一种融合蛋白、制备方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种融合蛋白，该融合蛋白包含两条多肽链，通过将配体和配体结合蛋白分别连接到抗体的重链恒定结构域CH1和轻链恒定结构域CL，形成融合蛋白。本发明还公开了经第一多肽链和第二多肽链形成抗体样CD25/IL‑2融合蛋白(Ab‑CD25/IL‑2‑Complex)，其具有消除或降低的对高亲和力IL‑2受体(IL‑2Rαβγ)的亲和力，并保留/增强对中等亲和力IL‑2受体(IL‑2Rβγ)的亲和力。本发明还公开了VHH/IL‑2融合蛋白(Ab‑VHH/IL‑2‑Complex)和IL15RA/IL‑15融合蛋白(Ab‑IL15RA/IL‑15‑Complex)。本发明还公开了该融合蛋白的缀合物、药物组合物、核酸分子、表达载体、宿主细胞、生产方法、试剂盒，以及其用途。CN115141283ACN115141283A权利要求书1/3页1.一种融合蛋白，其特征在于：包含第一多肽和第二多肽，所述的第一多肽、第二多肽从N端到C端分别具有如下所示的多肽结构式：第一多肽：A‑L1‑C1(式I)第二多肽：B‑L2‑C2(式II)或所述的第一多肽、第二多肽从N端到C端分别具有如下所示的多肽结构式：第一多肽：C1‑L1‑A(式Ⅲ)第二多肽：C2‑L2‑B(式Ⅳ)其中，A为配体，B为可以与A相互作用的配体结合蛋白；或A为配体结合蛋白，B为可以与A相互作用的配体；所述配体包括野生型配体或其变体；所述的变体包括该配体的突变体、改造体和截断体，以及该配体的胞外域和该配体胞外域的突变体、改造体、截断体；所述的配体结合蛋白包括野生型配体结合蛋白或其变体；所述的变体包括该配体结合蛋白的突变体、改造体和截断体，以及该配体结合蛋白的胞外域和该配体结合蛋白胞外域的突变体、改造体、截断体；C1为抗体轻链恒定结构域CL，C2为抗体重链恒定结构域CH1；且C1和C2之间可形成二硫键；所述CL包含人源抗体的CL或者具有与人源抗体的CL至少80％的序列相同性的氨基酸序列；所述CH1包含人源抗体的CH1或者具有与人源抗体的CH1至少80％的序列相同性的氨基酸序列；L1、L2各自独立的为接头元件或无。2.如权利要求1的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白还包括抗体Fc区，所述Fc区连接于第一多肽或第二多肽；所述的Fc区连接在第一多肽的C端，使第一多肽形成多肽结构式A‑L1‑C1‑L3‑Fc或C1‑L1‑A‑L3‑Fc；或所述的Fc区连接在第二多肽的C端，使第二多肽形成多肽结构式B‑L2‑C2‑L3‑Fc或C2‑L2‑B‑L3‑Fc；或所述的Fc区连接在第一多肽的N端，使第一多肽形成多肽结构式Fc‑L3‑A‑L1‑C1或Fc‑L3‑C1‑L1‑A；或所述的Fc区连接在第二多肽的N端，使第二多肽形成多肽结构式Fc‑L3‑B‑L2‑C2或Fc‑L3‑C2‑L2‑B，其中，抗体的Fc区包括人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM、IgE的Fc段或其变体、改造体；L3为接头元件或无。3.如权利要求1的融合蛋白，其特征在于：所述的配体为细胞因子、蛋白类激素分子、细胞膜上的配体或它们的变体、改造体、截断体；所述的配体结合蛋白是该配体的受体或其受体的变体、或该配体的抗体或其抗原结合片段；所述的变体包括：该受体的突变体、改造体、截断体，以及该受体胞外域和该受体胞外域的突变体、改造体、截断体。4.如权利要求3的融合蛋白，其特征在于：所述的细胞因子包括白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子、生长因子。5.如权利要求3的融合蛋白，其特征在于：所述的抗体或其抗原结合片段是单域抗体或单链抗体。6.如权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于：所述的配体是IL‑2，所述的配体结合蛋白是CD25的胞外域；2CN115141283A权利要求书2/3页或所述的配体是IL‑2