一种基因重组水痘-带状疱疹病毒融合蛋白及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115894707A(43)申请公布日2023.04.04(21)申请号202210903722.2(22)申请日2022.07.28(66)本国优先权数据202110858777.12021.07.28CN(71)申请人江苏瑞科生物技术股份有限公司地址225300江苏省泰州市医药高新区杏林路28号疫苗工程中心A217室申请人北京安百胜生物科技有限公司(72)发明人胡颖嵩张元杰邓家荔姚文荣吴双洪坤学陈健平刘勇(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/85(2006.01)A61K39/25(2006.01)A61P31/22(2006.01)权利要求书1页说明书13页附图1页(54)发明名称一种基因重组水痘-带状疱疹病毒融合蛋白及其制备方法和应用(57)摘要本发明利用基因重组技术，将由VZVgE蛋白截短获得的多肽片段gE1，和多肽片段gE2串联重组，并添加了人工信号肽，构建了目的融合基因，插入pcDNA3.1(+)表达载体，转化大肠杆菌DH5α，进行重组表达质粒的验证。然后将鉴定正确的重组表达质粒转染CHO细胞进行目的融合基因的表达，再经纯化得到了基因重组VZV融合蛋白gE1‑gE2，其纯度可达95％以上。与单纯的VZVgE蛋白相比，基因重组VZV融合蛋白能够诱导较之更强的细胞免疫反应。CN115894707ACN115894707A权利要求书1/1页1.一种基因重组VZV融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含由VZVgE蛋白截短获得的多肽片段gE1和多肽片段gE2，所述多肽片段gE1的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，所述多肽片段gE2至少包含gE蛋白的第31‑101位氨基酸，至多包含gE蛋白的第31‑194位氨基酸。2.如权利要求1所述的基因重组VZV融合蛋白，其特征在于，所述多肽片段gE2选自gE蛋白的第31‑101位氨基酸、第31‑119位氨基酸、第31‑140位氨基酸、第31‑161位氨基酸、第31‑181位氨基酸或第31‑194位氨基酸中的一种，序列依次如SEQIDNO：3‑8所示。3.如权利要求1或2所述的基因重组VZV融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO：15‑20中任一所示。4.一种权利要求1‑3所述的基因重组VZV融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、人工合成权利要求1‑3任一项所述的融合蛋白的基因序列，并将融合蛋白的基因连接入表达载体中，构建成重组表达质粒；S2、将构建的重组表达质粒转化宿主菌，通过双酶切鉴定和DNA测序，选取鉴定正确的重组质粒；S3、利用鉴定的重组质粒转染宿主细胞，并表达基因重组VZV融合蛋白，对其进行纯化。5.如权利要求4所述的基因重组VZV融合蛋白的制备方法，其特征在于，S1所述的表达载体为pcDNA3.1(+)。6.如权利要求4所述的基因重组VZV融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为中国仓鼠卵巢细胞。7.一种免疫原性组合物，其特征在于，所述免疫原性组合物包括权利要求1‑3任一项所述的融合蛋白。8.一种基因重组VZV疫苗，其特征在于，所述基因重组VZV疫苗包括权利要求1‑3任一项所述的融合蛋白，或权利要求7所述的免疫原性组合物，以及任选的可药用佐剂。9.如权利要求8所述的基因重组VZV疫苗，其特征在于，所述佐剂为铝盐类佐剂、弗氏完全佐剂、蜂胶佐剂、油水乳剂、细胞因子、CpG、DNA、基因工程减毒素、免疫刺激复合物或脂质体中的至少一种，优选地，所述脂质体佐剂为AS01B。10.如权利要求8所述的基因重组VZV疫苗，其特征在于，所述佐剂为选自BFA‑R837/PolyI:C、QS‑21/PolyI:C和BFA‑MPL/PolyI:C中任一项的脂质体制剂。2CN115894707A说明书1/13页一种基因重组水痘‑带状疱疹病毒融合蛋白及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物医学领域，尤其是基因工程疫苗领域，特别是涉及一种由VZVgE蛋白截短获得的多肽片段gE1，和多肽片段gE2串联重组构建而得的融合蛋白及其制备方法和应用。背景技术[0002]水痘－带状疱疹病毒(varicella‑zostervirus，VZV)属疱疹病毒α亚科，为双链DNA病毒，约为125000bp，编码约70个开放阅读框。病毒核衣壳直径约80～120nm，呈二十面体，周围包绕一层内膜及一层部分来自细胞膜的包膜。VZV原发感染引起水痘，患儿的全身症状和皮疹消退以后有少量残存的病毒会终身潜伏于宿主的脊髓后根神经节、颅神经节和肠道神经节的神经细胞中。日后当机体免疫力降低时，潜伏在神经细胞中的病毒会被再激活，导致疼痛性的皮肤疾病——带状疱疹(herpeszoster，HZ